dPCR LNA Mutation Assays

dPCR LNA Mutation Assays를 사용하면 COSMIC와 같이 종합적으로 선별된 데이터베이스에서 선택된 개별 서열 돌연변이를 검출할 수 있습니다. 분석 항목 디자인들은 dPCR 웨트 랩(wet-lab) 테스트를 거쳤으며 결과 데이터가 제공됩니다. QIAcuity Nanoplate 한 웰의 야생형(wild-type) 백그라운드에서 표적 돌연변이 검출에 대한 민감도는 0.1%입니다. 반응을 여러 웰로 나누고 분석을 결합하면 더 높은 민감도를 얻을 수 있습니다. 두 개의 서로 다른 형광 염료 조합을 선택하면 돌연변이체 및 야생형(wild-type) 서열을 검출할 수 있고 하나의 웰에서 두 개의 표적 돌연변이를 멀티플렉싱으로 분석할 수 있습니다.

해당 분석의 경우 바로 사용 가능한 30배 농축된 분석 항목이 튜브 형식으로 제공되며, 돌연변이 및 야생형(wild-type)에 대한 2개의 프라이머와 프로브로 구성됩니다. dPCR LNA Mutation Assays는 QIAcuity MasterMix와 함께 사용해야 합니다.

dPCR을 사용하면 희귀 이벤트/서열 변이체의 검출 및 절대 정량화에서 민감도를 높일 수 있으므로 야생형(wild-type) 유전체 DNA의 배경에서 0.1%의 돌연변이 존재를 검출할 수 있습니다. 분획으로 표적의 특정 농도 증가가 가능합니다. 종말점 증폭 및 노이즈와 구분되는 신호를 통한 표적에 대해 양성/음성 이진법적인 판독으로 정밀한 정량화가 가능하며, 이는 증폭 성능(예: PCR 억제제에 의한 원인)과는 무관합니다.

dPCR LNA Mutation Assays는 특정 돌연변이 서열의 존재를 식별하는 듀플렉스, 가수분해 프로브 기반 분석입니다. 하나의 프로브는 돌연변이 대립유전자를 검출하고 다른 프로브는 야생형(wild-type) 대립유전자를 검출합니다. 디지털 PCR은 야생형(wild-type) 배경에서 돌연변이 DNA 서열을 검출하는 가장 민감하고 신뢰할 수 있는 방법을 제공합니다. dPCR LNA Mutation Assays는 LNA로 강화된 프라이머와 프로브를 사용하여 분석 특이성과 민감도를 높여 하나의 나노플레이트 웰에서 야생형 유전체 DNA의 배경에 0.1%로 존재하는 돌연변이를 검출할 수 있습니다.

두 가지 형광 검출 옵션으로 하나의 웰에서 두 개의 돌연변이 표적을 멀티플렉스 분석할 수 있습니다. 제품 구성 시 돌연변이 + 야생형(wild-type) 검출을 위한 FAM + HEX 또는 Atto 550 + ROX 선택 가능.

dPCR 실험을 셋업하려면 유전체 DNA 샘플 분주(신선, 냉동 또는 고정 샘플로부터 분리)를 QIAcuity MasterMix 마스터 믹스 및 dPCR LNA Mutation PCR Assay에 추가합니다. 각 반응은 QIAcuity Nanoplate의 하나 또는 여러 웰에서 분석됩니다.

나노플레이트를 로딩하고 밀봉한 후 QIAcuity 기기에서 권장 사이클링 프로그램을 선택합니다. QIAcuity Software Suite의 절대 정량화 분석 유형에서 마이크로리터당 복제 수 결과가 표시됩니다. 돌연변이 표적의 계산된 분별 존재비(fractional abundance) 및 해당 데이터 수치가 분석 유형 돌연변이 분석에서 제공됩니다.

dPCR LNA Mutation PCR Assays는 신선한, 냉동 또는 고정 샘플의 DNA에 존재하는 개별 특정 서열 돌연변이를 빠르고 정확하게 식별하는 데 매우 적합합니다.