QIAamp DNA FFPE Advanced Kit – FFPE Tissue DNA Extraction

利用 QIAamp DNA FFPE Advanced Kit 的无二甲苯、免洗脱蜡、双裂解方案和超洁净生产 (ultra-clean production, UCP) 离心柱技术，提高您从 FFPE 组织中回收优质 DNA 的能力。

使用该试剂盒的可选 UNG 消化法去除核酸的 C→U 转换，从而优化回收的 DNA 以用于 NGS 分析。

您还可以在 QIAcube Connect 上自动化进行 QIAamp DNA FFPE Advanced 实验方案。

FFPE DNA 定量的一个特点是，不同的方法会得出不同的结果，紫外-可见光或荧光测定值高并不一定意味着 PCR 性能良好。

由于 real-time PCR 或定量 PCR (quantitative PCR, qPCR) 是 FFPE 最常见的下游应用之一，QIAamp DNA FFPE Advanced Kit 针对 qPCR 进行了优化。

无论测得的紫外-可见光或荧光值是多少，QIAamp DNA FFPE Advanced Kit 在 qPCR 定量下表现出的 PCR 性能始终优于其他受测产品（请参阅图“ 针对 PCR 性能进行了优化”）。

QIAamp DNA FFPE Advanced UNG Kit 还非常适合纯化用于 NGS 分析的 DNA，因为它解决了 FFPE 样本中因胞嘧啶脱氨基作用而常见的人为 C→T/G→A 转换问题（请参阅“ 人为 C→T/G→A 转换”）。

通过在 DNA 分离过程中进行基于 UNG 的尿嘧啶消化，QIAamp DNA FFPE Advanced UNG 方案可以减少 NGS 中单核苷酸变异 (single-nucleotide variant, SNV) 的假阳性报告（请参阅图“ 大幅减少人为 C→T | G→A 转换”）。

从 FFPE 组织中制备 DNA 时面临三大挑战：

• 因投入样本有限和 DNA 受损而致的产量低
• 因福尔马林诱导交联而导致 DNA 不可扩增
• 脱氨基胞嘧啶人为引入突变可能导致 NGS 突变分析结果错误

QIAamp DNA FFPE Advanced Kit 通过两种方式从有限的样本投入中最大限度提高 DNA 产量：

• 实施两步裂解程序，即使是难以裂解的样本也能确保从中提取大量 DNA
• 通过使用 Deparaffinization Solution 取代溶剂型进行脱蜡，可以免去初始裂解前的所有洗涤步骤，从而尽量降低损失稀缺样本材料的风险

去除交联进一步提高了可扩增 DNA 的回收率（请参阅图“ 针对 PCR 性能进行了优化”）。

可选择在第二次裂解前进行 UNG 处理，以去除脱氨基胞嘧啶人为引入突变，从而使 DNA 特别适合 NGS 分析（请参阅表“ 已针对 NGS 引发”，以及图“ 可靠的 dPCR 和 NGS 结果”和“ 大幅减少人为 C→T | G→A 转换”）。

QIAamp DNA FFPE Advanced 程序包括一个经优化脱蜡步骤、两个裂解步骤（其间进行去交联和可选的人为引入突变去除）以及标准的结合-洗涤-洗脱步骤（请参阅图“ QIAamp DNA FFPE Advanced 工作流程”）。

使用 QIAamp DNA FFPE Advanced Kit 从 FFPE 提取的 DNA 可立即用于 PCR、dPCR 或 NGS，也可在 -30 至 -15°C 下存放。