Taqs mögen es heiß und manche mögen es von Anfang an heiß
Standard-PCR oder Hot-Start-PCR?
Die Standard-Taq-Polymerase entfaltet ihre optimale Aktivität bei 72 °C, doch aktiv wird das Enzym schon ab etwa 37 °C. Die Aktivität bei niedrigeren Temperaturen ist beträchtlich und hat den Nachteil, dass sie unspezifische Amplifikationen und Mispriming-Ereignisse während der anfänglichen Niedrigtemperaturphase einer PCR-Reaktion zulässt. Für eine automatisierte PCR sollten Sie eine Hot-Start-Taq-Polymerase verwenden.
Im Gegensatz zur Standard-Taq sind Hot-Start-Polymerasen bei Raumtemperatur nicht reaktiv. Hot-Start-PCR-Techniken folgen denselben Prinzipien wie die konventionelle PCR, jedoch wird die enzymatische Aktivität bis zum Ende des ersten Denaturierungsschritts unterdrückt. Dies minimiert die unspezifische Bindung und das Mispriming, was die Spezifität verbessert. Darüber hinaus bietet diese Technik den großen Vorteil, dass die Reaktionen bei Raumtemperatur angesetzt werden können, was eine Automatisierung der PCR ermöglicht. In einigen Fällen verbessert sich sogar die Sensitivität, da durch die unspezifische Amplifikation die für die spezifische Zielamplifikation erforderlichen Reaktionskomponenten verbraucht werden.
Alle Taq-Polymerasen eignen sich für:
Enzym | Merkmale | Lieferung mit | |||||
---|---|---|---|---|---|---|---|
Hot-start (X min @ 95 °C) |
Amplifikatgröße | Verlängerungsrate | 5’-3’- Exonuklease |
PCR-Puffer | Ladepuffer | ||
P7250L Taq-B (Taq) |
Demnächst erhältlich | ✘ Nein | < 5 kb |
2–4 kb/min bei 72 °C |
✔ Ja | ✘ Nein | ✘ Nein |
P7620L TaqIT *(Stoffel) |
Demnächst erhältlich | ✘ Nein | < 7 kb | 2–4 kb/min bei 72 °C |
✘ Nein* | ✔ Ja | ✘ Nein |
201203 Taq |
✘ Nein | < 7 kb | 2–4 kb/min bei 72 °C |
✔ Ja | ✔ Ja + Q‑Lösung | ✔ Ja | |
201223 Taq PCR Core Kit |
✘ Nein | < 7 kb |
2–4 kb/min bei 72 °C |
✔ Ja | ✔ Ja + dNTPs | ✔ Ja | |
203123 AllTaq PCR Core Kit |
✔ Ja (2 min) | < 9 kb | 1 min/kb bei 68 °C |
✔ Ja | ✔ Ja + dNTPs | ✔ Ja | |
203203 HotStarTaq |
✔ Ja (15 min) | < 7 kb | 2–4 kb/min bei 72 °C |
✔ Ja | ✔ Ja + Q‑Lösung | ✘ Nein |
Häufige Fragen zu Enzymen für PCR und DNA-Amplifikation
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