QIAcuity OneStep Advanced Probe Kit

• HotStart-RT ermöglicht gleichzeitige Nanoplattenvorbereitung für QIAcuity Four und Eight
• Reaktionseinrichtung bei Raumtemperatur dank HotStart-RT
• Für Einzelplex- und Multiplex-Reaktionen
• 4-fach konzentrierter PCR-Master-Mix zum Laden von mehr Probe
• Fortschrittliche Robustheit gegen Inhibitoren

Das QIAcuity OneStep Advanced Probe PCR Kit ermöglicht die sensitive Quantifizierung von RNA- oder RNA+DNA-Zielen auf dem QIAcuity Gerät für die digitale PCR in einer kombinierten RT-PCR-Reaktion. Es enthält einen 4-fach konzentrierten Master-Mix und einen 100-fach konzentrierten RT-Mix, die für den mikrofluidischen Einsatz in den QIAcuity Nanoplates optimiert sind. Das Kit steigert die Spezifität und Effizienz der sondenbasierten digitalen PCR und ermöglicht eine genaue Einzelplex- oder bis zu 5-plex-Analyse.

Das neue Kit ist mit einem HotStart-Enzym für die reverse Transcription (RT) ausgestattet, das eine Reaktionseinrichtung bei Raumtemperatur und die gleichzeitige Nanoplattenvorbereitung zum Laden in QIAcuity Four oder Eight Geräte ermöglicht.

Das Kit wird zusammen mit dem QIAcuity Digital PCR System und den QIAcuity Nanoplates eingesetzt.

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Fortschrittliche Leistung bei der reversen Transkription

Der neue QIAcuity Advanced Reverse Transcription Mix umfasst die neue, zum Patent angemeldete HotStart-Technologie für die reverse Transkription von QIAGEN. Das neue HotStart-RT-Enzym ist bei Raumtemperatur nichtfunktional und verhindert so die Bildung von Nicht-Ziel-cDNA selbst bei Inkubation bei 37 °C über mehrere Stunden (siehe Abbildung  Schmelzkurvenanalyse der neuen HotStart-RT). Dadurch ermöglicht es eine Reaktionseinrichtung bei Raumtemperatur. Das HotStart-RT-Enzym ermöglicht Benutzern die Vorbereitung ihrer Reaktionen bei Raumtemperatur. Darüber hinaus erlaubt das HotStart-RT-Enzym Benutzern das gleichzeitige Vorbereiten und Laden mehrerer Nanoplatten, ohne sich Sorgen über unerwünschte und potenziell unspezifische RT-Aktivität machen zu müssen, während die Platten bei Raumtemperatur stehen. Das HotStart-RT-Enzym ist blockiert, während die Nanoplatten im QIAcuity Gerät auf ihren Einsatz warten, bis die Überführung in den Thermocycler erfolgt, wo der RT-Schritt des Protokolls stattfindet.

Enhancer GC fördert spezifische Assayleistung

Die Leistung von dPCR-Assays ist abhängig von den Sequenzen und dem Design von Primer und Sonden. Der GC-Gehalt und die Amplifikatlänge variieren bei Katalog- und individuell designten Assays. PCR-Chemien sind hinsichtlich einer universellen Verwendbarkeit und der bestmöglichen Leistung optimiert; manchmal wird jedoch die Zugabe spezifischer Verstärker empfohlen. Der neue Enhancer GC ist eine optionale Komponente (separates Fläschchen), die Sie der dPCR-Reaktion zugeben können, wenn die Amplifikate GC-reich oder länger als 150 nt sind. Er wird auch zur Verwendung mit Genexpressionsassays unter Einsatz von TaqMan (Thermo Fisher) empfohlen.

Tabelle: RT-Effizienz mit und ohne Enhancer GC

Überlegene Amplifikationsleistung

Das QIAcuity OneStep Advanced Probe Kit für die Hydrolysesonden-basierte dPCR verwendet die aktuellste Version der hochwertigen DNA-Polymerase von QIAGEN. Die einzigartige Kombination von QIAGENs proprietärer und bewährter Puffertechnologie, die für die Nanoplatten-Mikrofluidik optimiert wurde, mit der neuen QuantiNova DNA Polymerase liefert äußerst beständige Ergebnisse hinsichtlich der Sensitivität, Reproduzierbarkeit und Effizienz.

RNA als interne Kontrolle

Das QIAcuity OneStep Advanced Probe Kit enthält die QuantiNova Internal Control RNA (QN IC RNA), die optional zur Kontrolle der reversen Transkription und Amplifikation eingesetzt werden kann. Der separat erhältliche QuantiNova IC Probe Assay (200) (Kat.-Nr. 205813) weist die QuantiNova Internal Control RNA über ein 200-bp-Amplifikat im gelben Kanal auf dem QIAcuity Gerät nach. Die Primer- und Sonden sequenzen für den Nachweis der QuantiNova IC RNA wurden bioinformatisch auf Nichthomologie mit Hunderten eukaryotischen und prokaryotischen Organismen geprüft. Darüber hinaus wurden sie experimentell gegen eine Vielzahl von Human-, Maus- und Ratten-RNA-Proben aus verschiedenen Geweben und Zelllinien getestet.

HINWEIS: Benutzer sollten nicht den QuantiNova IC Probe Assay Red 650 (500) (Kat.-Nr. 205824) kaufen, da dieser nicht zur Verwendung mit dem QIAcuity optimiert ist.

Das QIAcuity OneStep Advanced Probe Kit enthält einen gebrauchsfertigen 4-fach-PCR-Master-Mix, sodass die Reaktions- und Cycling-Bedingungen nicht mehr optimiert werden müssen. Die OneStep-Chemie ermöglicht RT und Amplifikation der viralen RNA von Interesse in nur einem Schritt. In der OneStep-Reaktion können RNA- und DNA-Ziele auch zusammen nachgewiesen werden, z. B. virale RNA mit bakterieller DNA.

Das Prinzip der dPCR-Reaktion in den Nanoplatten finden Sie hier beschrieben.

Das QIAcuity OneStep Advanced Probe Kit enthält einen gebrauchsfertigen 4-fach PCR-Master-Mix, sodass die Reaktions- und Cycling-Bedingungen nicht mehr optimiert werden müssen. Geben Sie einfach 100x RT-Mix, RNA-Template und Primer-Sonden-Sets zum Master-Mix und befolgen Sie das Quick-Start-Protokoll, um schnelle und zuverlässige Ergebnisse mit dem QIAcuity zu erhalten. Mit dem neuen HotStart-RT-Enzym sind die parallele Vorbereitung und das gleichzeitige Laden mehrerer Nanoplatten in QIAcuity Four und Eight Geräte möglich (siehe Abbildung  Vorbereitung und Laden von Nanoplatten).

Zusammen mit dem QIAcuity Digital PCR System und den QIAcuity Nanoplates ermöglicht das QIAcuity OneStep Advanced Probe Kit die quantitative Analyse von RNA-Zielen für verschiedene Anwendungen, einschließlich des Nachweises von viraler RNA oder mRNA. Anwendungen, die den gleichzeitigen Nachweis von RNA- und DNA-Zielen erfordern – etwa beim Testen von Abwasser –, sind ebenfalls möglich.