Strep-Tactin Superflow Plus

• Dreifache Steigerung der Bindungskapazität (bis zu 9 mg/ml)
• Ideal für die Aufreinigung aus prokaryotischen und eukaryotischen Systemen
• Ermöglicht die automatische Aufreinigung mit jedem Flüssigchromatographiesystem
• Minimale Auswirkungen auf Proteinstruktur, -funktion und -immunogenität

Der kleine Strep-tag II (WSHPQFEK) kann für die Aufreinigung von aktiven Proteinen in nativer Konformation mit Strep-Tactin-Harzen verwendet werden, wobei eine hohe Reinheit erzielt wird. Darüber hinaus kann er in Kombination mit dem His-tag in einem standardisierten zweistufigen Aufreinigungsverfahren eingesetzt werden. Strep-Tactin ist als Superflow-Chromatographie-Harz für Aufreinigungen in größerem Maßstab (bis zu 9 mg/ml Harz) verfügbar. Strep-Tactin-Harz ist auch in vorgefüllten Kartuschen für die automatische Aufreinigung auf Flüssigchromatographiesystemen verfügbar.

Strep-Tactin Superflow Plus ermöglicht eine hocheffiziente Aufreinigung von Proteinen (siehe Abbildungen  Effiziente Aufreinigung von mit Strep-tag markiertem GFP mit Strep-Tactin Superflow Plus und  Hochspezifischer Nachweis von Proteinen mit Strep-tag in jedem Expressionssystem).

Die pQE TriSystem His·Strep TriSystem Vectors hingegen können zur Expression von Proteinen verwendet werden, die sowohl mit His- als auch mit Strep-tag markiert sind. Die Aufreinigung erfolgt in einem zweistufigen Affinitätsverfahren. Die sequenziellen Ni-NTA- und Strep-Tactin-Aufreinigungsschritte sind standardisiert, sehr schnell und liefern ultrareine Proteine.

Proteine mit Strep-tag binden mit hoher Affinität und Spezifität an Strep-Tactin, eine veränderte Form von Streptavidin (siehe Tabelle Proteinbindungskapazitäten von Strep-Tactin-Matrizes). Nach dem Waschen werden die Proteine mit niedrigen Konzentrationen von Biotin (dem natürlichen Liganden von Streptavidin) oder Desthiobiotin (einem stabilen, reversibel bindenden Biotinanalogon, siehe Abbildung Bindung von Proteinen mit Strep-tag an Strep-Tactin und Elution mit Desthiobiotin) eluiert. Die Markierung von Proteinen mit dem kleinen Strep-tag II ermöglicht die effiziente, standardisierte Aufreinigung rekombinanter, in prokaryotischen und eukaryotischen Systemen exprimierter Proteine und liefert hochreine Proteine. Darüber hinaus ist der Strep-tag II das System der Wahl in Situationen, in denen andere Tags möglicherweise ungeeignet sind, z. B. wenn Pufferzusätze wie EDTA benötigt werden, die IMAC-Säulen strippen könnten.

Proteine mit Strep-tag werden mit dem pQE TriSystem Vector exprimiert und mithilfe von Strep-Tactin Superflow Plus Affinitätsaufreinigungsverfahren in sehr hoher Reinheit aus Zelllysaten gewonnen. Proteine mit Strep-tag können mit Batch- oder Gravity-flow-Methoden aufgereinigt werden. Alternativ können FPLC-kompatible Säulen für die Aufreinigung auf Flüssigchromatographiesystemen mit Strep-Tactin Superflow Plus befüllt werden. Strep-Tactin Superflow Plus ist in 5-ml-Kartuschen für die automatisierte Aufreinigung mit Flüssigchromatographiesystemen wie FPLC, ÄkTA und BioLogic oder die manuelle Aufreinigung mit einer Spritze verfügbar. Reagenzien, die mit den Strep-Tactin-Harzen kompatibel sind, finden Sie in der Tabelle Mit der Interaktion zwischen Strep-tag und Strep-Tactin kompatible Reagenzien.

Die C-terminale Position des Tags stellt sicher, dass nur Volllängen-Proteine aufgereinigt werden. Der Aufreinigungsprozess ist hochreproduzierbar und garantiert Proteinpräparationen von stets gleichbleibend hoher Qualität. Monoklonale Strep-tag-Antikörper werden für die hoch sensitive und spezifische Immundetektion von Proteinen mit Strep-tag verwendet.

Strep-Tactin Superflow Plus kann für die effiziente und reproduzierbare Aufreinigung von bis zu 9 mg Protein mit Strep-tag je ml Harz verwendet werden. Die aufgereinigten Proteine können verwendet werden für:

• Funktions- oder Interaktionsstudien
• Kristallisierungsscreenings
• Strukturanalysen
• Gewinnung von Antikörpern