Ni-NTA Agarose
Para la purificación de proteínas marcadas con His mediante cromatografía de flujo por gravedad
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Ni-NTA Agarose es una matriz de cromatografía de afinidad para la purificación de proteínas recombinantes portadores de una etiqueta His. Los residuos de histidina en la etiqueta His se unen a las posiciones vacantes en la esfera de coordinación de los iones de níquel inmovilizados con alta especificidad y afinidad. Los lisados celulares limpios se cargan en las matrices. Las proteínas marcadas con His se unen y otras proteínas pasan a través de la matriz. Tras lavarse, las proteínas marcadas con His se eluyen en un tampón en condiciones nativas o desnaturalizantes.
Ni-NTA Agarose proporciona Ni-NTPA acoplado a un soporte de Sefarosa CL-6B y ofrece una alta capacidad de unión y una unión mínima no específica (consulta la figura Purificación en un paso en condiciones nativas). Este material tiene excelentes propiedades de manejo para la mayor parte de escalas de purificación por lotes y columnas. Ni-NTA Agarose está disponible por separado o como componente de los QIAexpress Kits, que son kits completos para una expresión y una purificación eficientes de proteínas marcadas con His de E. coli .
El QIAexpress Ni-NTA Protein Purification System se basa en la notable selectividad de la resina patentada Ni-NTA (ácido níquel-nitrilotriacético) para proteínas que contienen un marcador de afinidad de seis o más residuos de histidina (consecutivos o alternos): la etiqueta His. Esta tecnología permite la purificación en un paso de casi cualquier proteína marcada con His a partir de cualquier sistema de expresión en condiciones nativas o desnaturalizantes. El NTA, que tiene cuatro lugares de quelación para los iones de níquel, une el níquel con mayor fuerza que los sistemas de purificación por quelación de metales que solo tienen tres lugares disponibles para la interacción con iones de metal. El lugar adicional de quelación impide la lixiviación iónica del níquel y da lugar a una mayor capacidad de unión y a preparaciones de proteína con una pureza más elevada que las obtenidas mediante otros sistemas de purificación por quelación de metales. El sistema QIAexpress se puede utilizar para purificar proteínas marcadas con His a partir de cualquier sistema de expresión, incluyendo baculovirus, células de mamíferos, levaduras y bacterias.
Desnaturalizantes | Detergentes | Agentes reductores | Otros | Sales | Para almacenamiento a largo plazo |
---|---|---|---|---|---|
6 M de Gu·HCl | 2 % de Triton X-100 | 20 mM de ME | 50 % de glicerol | 4 M de MgCl2 | Hasta un 30 % de etanol |
8 M de urea | 2 % de Tween 20 | 10 mM de DTT | 20 % de etanol | 5 mM de CaCl2 | o 100 mM de NaOH |
1 % de CHAPS | 20 mM de TCEP | 20 mM de imidazol | 2 M de NaCl |
Las matrices Ni-NTA proporcionan una purificación fiable en un solo paso de las proteínas marcadas con His adecuadas para cualquier aplicación, entre las que se incluyen:
Features | Specifications |
---|---|
Applications | Proteómica |
Tag | Etiqueta 6xHis |
Bead size | 45-165 µm |
Special feature | Purificación por lotes y columnas |
FPLC | No |
Processing | Manual |
Support/matrix | Sefarosa CL-6B |
Start material | Lisado celular |
Scale | Gran escala |
Binding capacity | Hasta 50 mg/ml |
Gravity flow or spin column | Flujo de gravedad |
Yield | 100 µg – 100 mg |