✓ 24/7 automatic processing of online orders
✓ Knowledgeable and professional Product & Technical Support
✓ Fast and reliable (re)-ordering
Ni-NTA Superflow 96 BioRobot Kit (4)
Cat. No. / ID: 969261
Para 4 x 96 preparaciones de proteína marcadas con 6xHis: 4 QIAfilter 96 Plates, 4 TurboFilter 96 Plates, 1 x 100 ml Ni-NTA Superflow
El Ni-NTA Superflow 96 BioRobot Kit está concebido para su uso en aplicaciones de biología molecular. Este producto no está concebido para el diagnóstico, la prevención ni el tratamiento de enfermedades.
✓ 24/7 automatic processing of online orders
✓ Knowledgeable and professional Product & Technical Support
✓ Fast and reliable (re)-ordering
Features
- Purificación totalmente automatizada de hasta 2 mg de proteína por pocillo
- Proteína de alta pureza libre de contaminación cruzada
- Purificación en condiciones nativas o desnaturalizantes
Product Details
El Ni-NTA Superflow 96 BioRobot Kit proporciona una purificación automatizada de hasta 300 µg de proteína recombinante a partir de 96 muestras en paralelo (protocolo normalizado, 5 ml de volumen de cultivo por muestra). Los lisados celulares bacterianos limpios fluyen a una placa de filtro precargada con Ni-NTA Superflow mediante la estación de trabajo BioRobot. Este módulo único de cromatografía de afinidad por quelación de metal de 96 pocillos une con fuerza y selectivamente las proteínas marcadas con His. Los protocolos listos para ejecutar se proporcionan para la purificación en condiciones nativas o desnaturalizantes.
Performance
En respuesta a las necesidades de los clientes’ de mayores cantidades de proteína de procedimientos automatizados, QIAGEN ha adaptado el protocolo Ni-NTA Superflow 96 BioRobot para permitir el proceso de mayores volúmenes de cultivos y la purificación de hasta 2 mg cantidades de proteína marcadas con His por pocillo. El aumento de la cantidad de la resina Ni-NTA Superflow utilizada en el procedimiento de 200 µl por pocillo y una formulación optimizada de tampones de lisis permite procesar hasta 25 ml (purificación en condiciones nativas) o 15 ml (purificación en condiciones desnaturalizantes) de cultivos (protocolos de alto rendimiento). Los cultivos celulares se transmiten a bloques de 24 pocillos para su procesamiento. El aumento correspondiente en la biomasa puede producir un aumento del rendimiento de la proteína pura marcada con His por pocillo (consulte la tabla y la figura Cantidad de miligramos de proteínas marcadas con His por pocillo), lo que permite que varios ensayos se lleven a cabo en el mismo lote de proteínas y que se reduzca el número total de preparaciones de proteínas requeridas; consulte también la figura Cribado automatizado de clones de expresión. La purificación en un único paso proporciona proteínas de gran pureza en una amplia gama de rendimientos y se puede realizar la purificación de grandes complejos proteicos.
| Proteína marcada con His | Rendimiento total por pocillo (µg)* |
Concentración de proteína (mg/ml)† |
|---|---|---|
| Proteína verde fluorescente | 4000 | 6,0 |
| Polimerasa de ARN T7 | 1000 | 1,4 |
| GroES | 300 | 0,4 |
| Cloranfenicol acetiltransferasa | 2400 | 4,4 |
| GroEL | 740 | 1,0 |
| Factor de necrosis tumoral α | 1600 | 2,5 |
| GroES/GroEL | 1200 | 1,5 |
| Cpn-10 | 170 | 0,3 |
* Rendimiento obtenido en dos fracciones de elución de 550 µl (promedio de 6 purificaciones independientes). El 80 % de la proteína eluye en los primeros 550 µl.
† Concentración de proteína en la primera fracción de elución de 550 µl.
† Concentración de proteína en la primera fracción de elución de 550 µl.
See figures
Principle
El QIAexpress Ni-NTA Protein Purification System, incluyendo el Ni-NTA Superflow 96 BioRobot Kit, se basa en la notable selectividad de la resina patentada de Ni-NTA (ácido níquel-nitrilotriacético) para proteínas que contienen un marcador de afinidad de seis o más residuos de histidina: — el marcador His. Esta tecnología permite la purificación en un paso de casi cualquier proteína marcada con His a partir de cualquier sistema de expresión en condiciones nativas o desnaturalizantes. El NTA, que tiene cuatro lugares de quelación para los iones de níquel, une el níquel con mayor fuerza que los sistemas de purificación por quelación de metales que solo tienen tres lugares disponibles para la interacción con iones de metal. El lugar adicional de quelación impide la lixiviación iónica del níquel y da lugar a una mayor capacidad de unión y a preparaciones de proteína con una pureza más elevada que las obtenidas mediante otros sistemas de purificación por quelación de metales. El sistema QIAexpress se puede utilizar para purificar proteínas marcadas con His a partir de cualquier sistema de expresión, incluyendo baculovirus, células de mamíferos, levaduras y bacterias. (Consulte la figura Purificación de proteína con el sistema de purificación de proteína Ni-NTA).
See figures
Procedure
La purificación de las proteínas marcadas con His se divide en 4 etapas: lisis, unión, lavado y elución celular y es la base del Ni-NTA Superflow BioRobot Kit (consulte Ni-NTA Superflow 96 BioRobot Kit). La purificación de proteínas recombinantes utilizando el sistema QIAexpress no depende de la estructura tridimensional de la proteína o de la etiqueta 6xHis. Esto permite la purificación de proteínas en un paso en condiciones nativas o desnaturalizantes, a partir de soluciones diluidas y lisados sin procesar. Los desnaturalizantes y detergentes fuertes se pueden utilizar para la solubilización y purificación eficientes de los receptores, las proteínas de membrana y las proteínas que forman cuerpos de inclusión. Los reactivos que permiten una eliminación eficiente de contaminantes de unión no específicos se pueden incluir en tampones de lavado (consulte la tabla). Las proteínas purificadas se eluyen en condiciones suaves añadiendo 100-250 mM de imidazol como competidor o por reducción del pH.
El Ni-NTA Superflow 96 BioRobot Kit está diseñado para su uso con las estaciones de trabajo BioRobot 3000, 8000 o 9600. .
| Desnaturalizantes | Detergentes | Agentes reductores | Otros | Sales | Para almacenamiento a largo plazo |
|---|---|---|---|---|---|
| 6 M de Gu·HCl | 2 % de Triton X-100 | 20 mM de ME | 50 % de glicerol | 4 M de MgCl2 | Hasta un 30 % de etanol |
| 8 M de urea | 2 % de Tween 20 | 10 mM de DTT | 20 % de etanol | 5 mM de CaCl2 | o 100 mM de NaOH |
| 1 % de CHAPS | 20 mM de TCEP | 20 mM de imidazol | 2 M de NaCl |
See figures
Applications
El QIAexpress Ni-NTA Protein Purification System proporciona una purificación fiable en un paso de proteínas adecuadas para muchas aplicaciones, entre las que se incluyen:
- Investigaciones estructurales y funcionales
- Cristalización para la determinación de la estructura tridimensional
- Ensayos relacionados con interacciones proteína-proteína y proteína-ADN
- Inmunización para producir anticuerpos
Supporting data and figures
Cribado de clonación de expresión automatizada.
Purificación a media escala para el cribado de clones de expresión y la caracterización de proteínas. Una mezcla de construcciones vectoriales para la expresión de proteínas de 12, 15 y 28 kDa y un heterodímero de 48/50 kDa se transformó en E. coli y se sembró en un medio selectivo; se escogieron 96 colonias al azar para inocular cultivos de 5 ml. La expresión de las proteínas marcadas con 6xHis se indujo con IPTG durante la noche. Las células se sedimentaron y se lisaron, y se purificaron las proteínas marcadas con 6xHis. Se cargaron 5 µl de cada fracción de elución para el análisis SDSPAGE; las proteínas se visualizaron mediante tinción de coomassie.
Resources
Safety Data Sheets (1)
Kit Handbooks (2)
Supplementary Protocols (2)
Technical Information (2)
Certificates of Analysis (1)
FAQ
What are your recommendations for PCR template preparation for use with the EasyXpress Insect Kit II?
What are the features and benefits of the QIAexpress 6xHis Tag System?
Can Ni-NTA resins be used to purify protein with an internal His-tag?
Do you have a protocol for manual purification of 6xHis-tagged proteins expressed in E. coli using Ni-NTA Superflow?