Limpieza enzimática | Eliminación de residuos y artefactos no deseados

Estos buenos limpiadores pulen, cortan y recortan

Los reactivos y reactantes que se quedan atrás pueden obstaculizar los procesos posteriores. Utilice la preparación enzimática adecuada para limpiar sus muestras antes de comenzar el siguiente paso. Acelere y mejore la amplificación y la transcripción con algunos aditivos no tan secretos.

Enzimas para escisión y limpieza de reactivos residuales

La limpieza enzimática de muestras de ADN con Exonuclease I, DNase I, RNase A y proteasas elimina los cebadores, nucleótidos y enzimas residuales antes del análisis de SNP, la secuenciación de próxima generación, la secuenciación de ADN Sanger u otros análisis anterógrados.

La enzima TAGZyme DAPase y el sistema TAGZyme se utilizan para la eliminación de la etiqueta His de proteínas que contienen un punto de parada intrínseco DAPase (expresado utilizando el vector TAGZyme pQE-2) o de proteínas que contienen un punto de parada de glutamina diseñado.

Enzima		Actividad	Aplicación
X8010L Exonuclease I	Próximamente	La exonucleasa I escinde el ADN monocatenario en la dirección 3’→5’, liberando los mono/dinucleótidos de 5’ y dejando intactas las moléculas de ADN bicatenario y el extremo 5’; la digestión se inhibe por la presencia de un fosfato de extremo 3’.	Eliminación de primers monocatenarios en reacciones de PCR antes del análisis de SNP o la secuenciación Sanger del ADN Eliminación de primers monocatenarios para reacciones de PCR anidadas Eliminación del ADN monocatenario lineal, dejando ADN bicatenario en la muestra
79254 RNase-free DNase (1500 unidades Kunitz)		Endonucleasa que corta inespecíficamente el ADN para liberar productos di-, tri- y oligonucleótidos con 5’ extremos fosforilados y 3’ hidroxilados; actúa sobre ADNmc y ADNbc, cromatina e híbridos ARN:ADN	Eliminación del ADN contaminante de las soluciones de ARN antes de la limpieza y concentración del ARN Extracción de ADN de muestras de proteínas Fragmentación del ADN como primer paso para incorporar bases etiquetadas al ADN Análisis de la interacción ADN-proteína (ensayo de huellas)
19101 RNase A		Endorribonucleasa que degrada el ARNmc en residuos C y U	Eliminación del ARN contaminante de las preparaciones de plásmidos y ADN genómico Eliminación del ARN de las preparaciones de proteínas recombinantes Identificación de mutaciones de una única base en el ADN o el ARN (ensayo de protección de la RNase)
19131 Proteinase K		QIAGEN Proteinase K es una proteasa de tipo subtilisina aislada del hongo saprofito Tritirachium album	Digestión con proteasas en los procedimientos de aislamiento de ADN y ARN Proteinase K posee una elevada actividad específica; es estable en una amplia gama de temperaturas y valores de pH; no la inhibe el EDTA; es adecuada para tiempos de digestión cortos
19155 Protease		QIAGEN Protease es una proteasa de serina aislada de una cepa recombinante de Bacillus; una alternativa económica a Proteinase K	Digestión con proteasas en el aislamiento de ADN y ARN nativos de diversas fuentes
34362 TAGzyme DAPase Enyzme		TAGZyme DAPase (dipeptidil peptidasa I recombinante)	Eliminación secuencial de dipéptidos a partir de etiquetas His N-terminales hasta el "punto de parada" expresado mediante vectores TAGZyme pQE Producción de proteínas sin la etiqueta His para: Determinación de la estructura de las proteínas Proteínas terapéuticas

Mejora de los rendimientos

El uso de proteínas de unión al ADN en las reacciones de amplificación y secuenciación puede mejorar el rendimiento y la calidad de esas moldes. La proteína de unión al ADN, proteína del gen 32 del bacteriófago T4 (T4gp32), aumenta la eficacia de la amplificación por PCR con una serie de moldes diversos. Además, el uso de la proteína de unión al ADN monocatenario (single-stranded DNA-binding, SSB) de E. coli en las reacciones de secuenciación del ADN aumenta la resolución de las series de secuenciación.

El tratamiento con pirofosfatasa inorgánica, componente esencial de las reacciones de preparación del ARN, permite aumentar la tasa de transcripción in vitro. Esta enzima escinde el pirofosfato en dos moléculas de fosfato e impide que el pirofosfato precipite con el magnesio.

Reactivo		Actividad	Aplicación
Y9030L E. coli ssDNA Binding Protein	Próximamente	Se une con gran especificidad al ADN monocatenario; termoestable	Útil en el secuestro de primers Útil para aumentar la especificidad de la PCR Útil para permitir la secuenciación de moldes de ADN problemáticos
Y9130L T4 Gene 32 Protein	Próximamente	Estabiliza las regiones de ADN de cadena sencilla	Aumenta la procesividad de algunas ADN polimerasas
Y9380L E. coli pyrophosphatase	Próximamente	Pirofosfatasa inorgánica que cataliza la hidrólisis del pirofosfato inorgánico para formar ortofosfato*.	Aumenta el rendimiento del ARN en la reacción de transcripción Mejora de la replicación del ADN
Y9370L Thermostable pyrophosphatase	Próximamente	La pirofosfatasa termoestable es una enzima recombinante de Sulfolobus acidocaldarius que cataliza la hidrólisis del pirofosfato inorgánico para producir ortofosfato†	Útil para potenciar la replicación del ADN en la PCR

Escisión de hebras mediada por UDG

La escisión de hebras mediada por UDG (Uracil ADN glicosilasa en inglés) es una herramienta importante en biotecnología molecular, que permite la escisión controlada y de localización específica de ADN monocatenario o bicatenario sintetizado química o enzimáticamente con incorporaciones únicas o múltiples de desoxiuridina.

Los tratamientos con UDG pueden reducir los artefactos de secuencia, eliminar el arrastre de PCR y generar huecos específicos en el ADN.

Enzima		Actividad	Aplicación
19160, G5010L Uracil DNA Glycosylase (UDG) G5020L Thermolabile UDG	Próximamente	La glicosilasa de ADN de uracilo (UDG) interviene en la reparación por escisión de bases; la UDG crea puntos abásicos en el ADN que contiene uracilo; degrada el ADN que contiene uracilo.	El pretratamiento del ADN con UDG reduce los artefactos del ADN durante la detección de mutaciones por secuenciación de nueva generación y otros métodos, sin afectar a la capacidad de detectar mutaciones reales. Elimina los artefactos de uracilo (citosina desaminada) de las preparaciones FFPE. La UDG termolábil puede utilizarse para eliminar la contaminación por “arrastre” de la PCR cuando se sustituye el dTTP por el dUTP en la mezcla de reacción de la PCR primaria.
Y9180L 10X Uracil Cleavage System	Próximamente	El sistema consta de dos componentes enzimáticos, Uracil DNA Glycosylase y Endonuclease VIII. Cuando las enzimas se añaden secuencialmente a una reacción en la que un fragmento de ADN sintético contiene un desoxiuracilo, se genera un hueco de un solo nucleótido en la ubicación del residuo de uracilo	Genera enzimáticamente huecos de nucleótidos de uracilo in vitro La UDG es una enzima específica del ADN que no elimina el uracilo de sustratos de ARN. La incorporación dirigida de nucleótidos de desoxiuridina en oligonucleótidos puede utilizarse con el sistema enzimático para la escisión específica de secciones de ADN o moldes de ADN, a partir de híbridos ADN:ARN.
Y9080L Endonuclease VIII	Próximamente	Endonuclease VIII funciona a la vez como N-glicosilasa (eliminando las lesiones oxidativas de la base) y como AP-liasa (eliminando posteriormente el grupo fosfodiéster), dejando fosfatos terminales en los extremos 5’ y 3’; participa en la reparación por escisión de bases de los daños oxidativos del ADN	Elimina las pirimidinas dañadas del ADN doble Se utiliza para medir el daño en el ADN mediante electroforesis en gel unicelular (ensayo cometa)

Enzima

Actividad

Aplicación

19160, G5010L
Uracil DNA
Glycosylase (UDG)

G5020L
Thermolabile UDG

Próximamente

La glicosilasa de ADN de uracilo (UDG) interviene en la reparación por escisión de bases; la UDG crea puntos abásicos en el ADN que contiene uracilo; degrada el ADN que contiene uracilo.

El pretratamiento del ADN con UDG reduce los artefactos del ADN durante la detección de mutaciones por secuenciación de nueva generación y otros métodos, sin afectar a la capacidad de detectar mutaciones reales.
Elimina los artefactos de uracilo (citosina desaminada) de las preparaciones FFPE.
La UDG termolábil puede utilizarse para eliminar la contaminación por “arrastre” de la PCR cuando se sustituye el dTTP por el dUTP en la mezcla de reacción de la PCR primaria.

Y9180L
10X Uracil Cleavage
System

Próximamente

El sistema consta de dos componentes enzimáticos, Uracil DNA Glycosylase y Endonuclease VIII. Cuando las enzimas se añaden secuencialmente a una reacción en la que un fragmento de ADN sintético contiene un desoxiuracilo, se genera un hueco de un solo nucleótido en la ubicación del residuo de uracilo

Genera enzimáticamente huecos de nucleótidos de uracilo in vitro
La UDG es una enzima específica del ADN que no elimina el uracilo de sustratos de ARN. La incorporación dirigida de nucleótidos de desoxiuridina en oligonucleótidos puede utilizarse con el sistema enzimático para la escisión específica de secciones de ADN o moldes de ADN, a partir de híbridos ADN:ARN.

Y9080L
Endonuclease VIII

Próximamente

Endonuclease VIII funciona a la vez como N-glicosilasa (eliminando las lesiones oxidativas de la base) y como AP-liasa (eliminando posteriormente el grupo fosfodiéster), dejando fosfatos terminales en los extremos 5’ y 3’; participa en la reparación por escisión de bases de los daños oxidativos del ADN

Elimina las pirimidinas dañadas del ADN doble
Se utiliza para medir el daño en el ADN mediante electroforesis en gel unicelular (ensayo cometa)

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