therascreen BRAF RGQ PCR Kit CE

Pour la détection de mutations somatiques de l’oncogène BRAF

Products

1. Manuel du kit therascreen BRAF RGQ PCR. Version 1, révision 1. Août 2012. © QIAGEN France S.A.S. 2013 Les informations relatives aux dispositifs médicaux in vivo et in vitro contenues dans ce site sont à destination des professionnels de santé. Pour plus d'informations, nous vous invitons à consulter le manuel d'utilisation de l'équipement et/ou la notice d'utilisation du réactif.

The therascreen BRAF RGQ PCR Kit CE is intended for in vitro diagnostic use in Europe.

Caractéristiques

Conforme à la directive européenne IVD 98/79/CE
Test sensible et robuste pouvant détecter de faibles niveaux d’ADN mutant
Système prêt à l’emploi et procédure simple
Spécificité et sensibilité élevées grâce aux technologies de PCR ARMS et Scorpions

Détails produit

Le kit therascreen BRAF RGQ PCR est un kit de diagnostic moléculaire destiné à la détection des mutations somatiques du gène BRAF par PCR en temps-réel, sur l’instrument Rotor-Gene Q 5plex HRM. Ce kit inclut tous les réactifs nécessaires, optimisés pour la détection rapide et sensible d’un faible pourcentage d’ADN mutant sur un fond d’ADN génomique de type sauvage. La technologie de PCR ARMS (système de mutation réfractaire par amplification) combinée à la technologie de détection Scorpions permettent des niveaux de sensibilité et de spécificité exceptionnels pour la détection de mutations spécifiques. (1)

Principe

Le kit therascreen BRAF RGQ PCR est un kit prêt à l’emploi destiné à la détection des mutations somatiques de l’oncogène BRAF à l’aide de la technique de réaction en chaîne par polymérase (PCR) sur l’instrument Rotor-Gene Q 5plex HRM. Le gène BRAF encode l’homologue B1 de l’oncogène viral kinase V-raf murine sarcoma, un proto-oncogène agissant en aval de l’EGFR. Le kit permet la mesure qualitative des mutations somatiques de l’oncogène BRAF dans l’ADN génomique extrait d’échantillons fixés au formaldéhyde et inclus en paraffine (FFPE). (1)

Le kit therascreen BRAF RGQ PCR permet de détecter les mutations suivantes dans un bruit de fond d’ADN génomique de type sauvage. (1)

V600E (GAG) et V600E complexe (GAA)

V600D (GAT)

V600K (AAG)

V600R (AGG)

Le kit détecte la présence de V600E (GAG) et V600E complexe (GAA) mais ne les distingue pas l’une de l’autre. (1)

Le kit therascreen BRAF RGQ PCR utilise deux technologies, ARMS (système de mutation réfractaire par amplification) et Scorpions, pour détecter les mutations en PCR en temps-réel. (1)

ARMS

L’amplification spécifique d’allèle ou de mutation s’effectue par le biais du système ARMS. La Taq ADN polymérase permet d’établir une distinction efficace entre un appariement et un mésappariement à l’extrémité 3' d’une amorce de PCR. Des séquences aux mutations spécifiques sont sélectionnées pour être amplifiées, même dans des échantillons où la majorité des séquences ne porte pas la mutation. Lorsque l’amorce est entièrement appariée, l’efficacité de l’amplification est maximale. Lorsque la base 3' est mésappariée, seule une amplification de faible bruit de fond se produit. (1)

Scorpions

La détection de l’amplification s’effectue par le biais de la technologie Scorpions. Les sondes Scorpions sont des molécules bi-fonctionnelles contenant une amorce de PCR qui comporte une liaison covalente avec une sonde. Le fluorophore de cette sonde interagit avec un quencher, lui aussi intégré à la sonde, qui diminue la fluorescence. Au cours d’une PCR, lorsque la sonde s’hybride à l’amplicon, le fluorophore et le quencher se séparent. La fluorescence du tube de réaction augmente. (1)

Procédure

Le kit therascreen BRAF RGQ PCR comporte une procédure en deux étapes. La première étape consiste à effectuer un test de contrôle pour évaluer l’ADN total présent dans un échantillon. La seconde consiste à effectuer le test de mutation pour détecter la présence ou non d’ADN muté. (1)

Applications