therascreen KRAS RGQ PCR Kit
pour la détection de 7 mutations somatiques de l’oncogène KRAS.
Products
Features
- Respect de la directive européenne IVD 98/79/CE
- Test sensible et robuste pouvant détecter de faibles niveaux d’ADN mutant
- Système prêt à l’emploi et procédure simple
- Sélectivité et sensibilité élevées grâce aux technologies de PCR ARMS et Scorpions
Product Details
Le kit therascreen BRAF RGQ PCR est un kit de diagnostic moléculaire destiné à la détection de 7 mutations somatiques du gène KRAS en PCR en temps réel, sur l’instrument Rotor-Gene Q 5plex HRM. Ce kit inclut tous les réactifs nécessaires, optimisés pour la détection rapide et sensible d’un faible pourcentage d’ADN mutant dans un bruit de fond d’ADN génomique de type sauvage. La technologie de PCR ARMS (système de mutation réfractaire par amplification) combinée à la technologie de détection Scorpions permettent des niveaux de sensibilité et de spécificité exceptionnels pour la détection de mutations spécifiques.
Principle
Le kit therascreen KRAS RGQ PCR est conçu pour détecter 7 mutations dans les codons 12 et 13 du gène KRAS. Le gène KRAS encode une protéine qui joue un rôle essentiel dans la cascade de signaux EGFR. Les mutations du gène KRAS peuvent affecter la manière dont les protéines stimulent ces voies en aval. Le gène KRAS est muté dans près de 30 % de l’ensemble des types de cancer. Parmi les cancers qui présentent une haute fréquence de la mutation du gène KRAS se trouvent le cancer colorectal (35 %) et le cancer du poumon (18 %).
Les mutations du gène KRAS détectées par le kit therascreen KRAS RGQ PCR incluent les suivantes :
Le kit utilise deux technologies, ARMS (système de mutation réfractaire par amplification) et Scorpions, pour détecter les mutations en PCR en temps réel.
ARMS
L’amplification spécifique d’allèle ou de mutation s’effectue par le biais du système ARMS. La Taq ADN polymérase permet d’établir une distinction efficace entre un appariement et un mésappariement à l’extrémité 3' d’une amorce de PCR. Des séquences aux mutations spécifiques sont sélectionnées pour être amplifiées, même dans des échantillons où la majorité des séquences ne porte pas la mutation. Lorsque l’amorce est entièrement appariée, l’efficacité de l’amplification est maximale. Lorsque la base 3' est mésappariée, seule une amplification de faible bruit de fond se produit.
Scorpions
La détection de l’amplification s’effectue par le biais de la technologie Scorpions. Les Scorpions sont des molécules bi-fonctionnelles contenant une amorce de PCR qui comporte une liaison covalente avec une sonde. Le fluorophore de cette sonde interagit avec un quencher, lui aussi intégré à la sonde, qui diminue la fluorescence. Au cours d’une PCR, lorsque la sonde s’hybride à l’amplicon, le fluorophore et le quencher se séparent. La fluorescence du tube de réaction augmente.
Procedure
Le kit therascreen KRAS RGQ PCR fonctionne selon une procédure à deux étapes. La première étape consiste à effectuer un test de contrôle pour évaluer l’ADN total présent dans un échantillon. La seconde consiste à effectuer le test de mutation pour détecter la présence ou non d’ADN ayant subi une mutation.
Applications
Le kit therascreen KRAS RGQ PCR est conçu pour détecter 7 mutations dans les codons 12 et 13 du gène KRAS. Des études prouvent que le test de la mutation de KRAS est plus à même de déterminer quels patients atteints du cancer colorectal métastatique peuvent bénéficier d’un traitement avec récepteur de facteur de croissance épidermique (EGFR) qui inhibe les anticorps monoclonaux, tel que le panitumumab ou le cétuximab.
Resources
Kit Handbooks (1)
Supplementary Protocols (1)
Safety Data Sheets (2)
Certificates of Analysis (1)