dPCR Copy Number Assays

• Dosages préconçus pour tous les gènes du génome humain
• Choix de 3 emplacements de conception par gène : 5’, milieu et 3’
• Encore plus de dosages préconçus disponibles sur demande
• Les dosages pour > 200 cibles ont été testés par dPCR en laboratoire humide
• Format simple et direct pour une utilisation en dPCR
• Commodité de l’analyse des données de nombre de copies grâce à la QIAcuity Software Suite

Les dPCR Copy Number Assays permettent une analyse spécifique, exacte, reproductible et facile à interpréter des modifications du nombre de copies pour un gène individuel ou une région d’intérêt. Les dosages pour plus de 200 cibles ont été testés par dPCR en laboratoire humide. Toutes les autres conceptions in silico ont été vérifiées à la paillasse et sont prêtes à l’emploi dans les études de suivi par NGS, le criblage spécifique aux cibles et les autres études connexes.

Les dPCR Copy Number Assays sont disponibles au format tube sous forme de dosages prêts à l’emploi à la concentration 25x. Le tube contient la paire d’amorces à utiliser avec le QIAcuity EG PCR Kit et l’instrument QIAcuity. Les dosages testés par dPCR en laboratoire humide sont signalés comme tels dans l’affichage du produit de dosage spécifique.

La vérification en laboratoire de la qualité des dosages permet de garantir que les dPCR Copy Number PCR Assays produisent des résultats fiables. L’analyse du nombre de copies par PCR digitale peut permettre d’identifier avec exactitude l’aneuploïdie dans les lignées cellulaires contenant des aberrations chromosomiques précédemment identifiées à l’aide de méthodes cytogénétiques. La PCR digitale permet la détection de modifications du nombre de copies ne dépassant pas 1,2 fois, soit de 5 à 6 copies. Le partitionnement de la réaction de dPCR est le facteur déterminant pour atteindre le niveau de discrimination nécessaire à la résolution de modifications aussi faibles.

Pour la normalisation, des dosages de référence correspondant à différents nombres de copies par génome humain sont également disponibles.

Tous les dPCR Copy Number PCR Assays sont conçus pour des régions uniques du génome humain. Les dPCR Copy Number Reference Assays (disponibles séparément) comprennent diverses références avec différents nombres de copies dans le génome, offrant la possibilité de sélectionner des références de normalisation optimales pour chaque analyse. Nous recommandons d’inclure deux dosages de référence pour permettre de calculer avec exactitude le nombre de copies du gène ou de la cible d’intérêt.

Les dPCR Copy Number Assays sont prêts à l’emploi : il suffit d’ajouter l’échantillon d’ADN et le mélange principal du QIAcuity EG PCR Kit aux dosages individuels ou aux dosages de référence dans la QIAcuity Nanoplate. La détection est basée sur le colorant intercalant EvaGreen.

Vous trouverez ici une description du principe de la réaction de dPCR sur nanoplaque.

Pour configurer l’expérience de dPCR, ajouter une aliquote de l’échantillon d’ADN génomique (isolé à partir d’échantillons frais, congelés ou fixés) au mélange principal du QIAcuity EG PCR Kit et au dPCR Copy Number Assay. Chaque gène ou cible d’intérêt et chaque dosage de référence sont analysés dans leur propre puits.

Après chargement et scellage de la nanoplaque, traitez la plaque avec le programme de thermocyclage recommandé sur l’instrument QIAcuity. Le nombre de copies par microlitre est indiqué dans le type d’analyse de quantification absolue de la QIAcuity Software Suite. Pour le calcul du nombre de copies par génome, sélectionnez le type d’analyse des données de nombre de copies dans la QIAcuity Software Suite, et définissez les puits de la nanoplaque pour le gène/la région d’intérêt ou la référence de normalisation.

Les dPCR Copy Number Assays sont particulièrement adaptés à la détection avec exactitude des altérations ou variations du nombre de copies dans des loci individuels à l’aide d’ADN provenant d’échantillons frais, congelés ou fixés.