Tout pour l’ARN : amplifier, séquencer, lier et marquer
Détectez et manipulez l’ARN par amplification
Les transcriptases inverses sont des enzymes capables de polymériser un brin d’ADN (ADNc) qui est complémentaire d’un ARN matriciel d’origine. L’ARN est susceptible d’être dégradé par les RNases, le recours à une enzyme transcriptase inverse pour produire un ADNc permet d’éviter de manipuler l’ARNm. L’ADNc devient une matrice stable dans de nombreuses applications en aval destinées à l’étude de l’ARN, notamment l’analyse de l’expression génique. Vous pouvez utiliser la PCR classique, la qPCR, la RT-qPCR en une étape ou des méthodes isothermes pour l’amplification de l’ADNc matriciel. L’amplification peut être suivie d’un clonage avec des protocoles d’enzyme classiques ou d’un clonage indépendant de la ligature utilisant l’activité de l’exonucléase 3’→5’ de l’ADN polymérase T4.
Toutes les enzymes transcriptases inverses (ADN polymérases ARN-dépendantes) peuvent être utilisées pour :
RNase H (+/-) |
Applications spécialisées | ||
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P7600L EnzScript |
Prochainement | Moins | Pour les ADNc longs et les banques contenant un pourcentage élevé d’ADNc pleine longueur ; applications nécessitant un changement de matrice, comme le séquençage d’ARN (RNA-Seq) |
P7720L StableScript |
Prochainement |
Moins |
Pour les ADNc longs ; meilleure processivité, résistance aux inhibiteurs et thermostabilité |
205111 Omniscript Kit |
Plus | Marquage pour les puces à ADN ; spécialement conçu pour la transcription inverse quelle que soit la quantité d’ARN ; tampon optimisé ; étape RNase H inutile |
ARN polymérases et ligases
Les ARN polymérases, ou plus spécifiquement les ARN polymérases ADN-dépendantes, sont des enzymes qui synthétisent l’ARN à partir d’un ADN matriciel. L’enzyme polymérase, poly(A), utilise l’ARN simple brin comme amorce pour ajouter une queue poly(A) à l’ARN en catalysant l’intégration de résidus d’adénine aux terminaisons 3’ de l’ARN.
Les ARN ligases T4 sont des enzymes utiles pour analyser l’ARN, notamment en amont de procédures telles que le séquençage d’ARN à haut débit et les puces à ADN. Les ARN ligases T4 1 et 2 sont des enzymes capables de marquer, circulariser ou réaliser une ligature intermoléculaire de l’ARN en liant les polynucléotides adjacents 3'-OH et 5'-PO4. La fixation des adaptateurs aux extrémités 3' de l’ARN avec l’ARN ligase T4 1 est une première étape utile pour la quantification de l’ARN et la découverte par RT-PCR et séquençage à haut débit.
Action | Applications | ||
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P7180L ARN polymérase T7 |
Prochainement | Synthétise l’ARN dans le sens 5’→ 3’ à partir de l’ADN matriciel ; spécifique au promoteur T7 |
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P7460L Polymérase poly(A) |
Prochainement |
Catalyse l’ajout d’AMP à partir d’ATP au 3’-OH de l’ARN |
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L6050L ARN ligase T4 1 |
Prochainement | ARN ligase simple brin ; relie également les molécules d’ADN simple brin |
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L6080L ARN ligase T4 2 |
Prochainement | Ligature les césures sur l’ARNdb ; capable de ligaturer le 3’-OH de l’ARN au 5’-PO4 de l’ADN en hybrides double brin |
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L6070L |
Prochainement | Catalyse la formation d’une liaison phosphodiester entre un phosphate 5’ pré-adénylation (ADN ou ARN) et l’hydroxyle 3’ de l’ARN |
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Digérer l’ARN et protéger l’ARN
Le dosage de protection de la ribonucléase (RPA) avec l’enzyme RNase A est une technique qui permet de déterminer le nombre relatif ou absolu de transcriptions et de cartographier les terminaisons d’ARNm ainsi que les limites intron/exon.
Les substitutions d’une base peuvent être détectées et localisées par une méthode enzymatique simple qui implique le clivage RNase A des mésappariements d’une base dans des hétéroduplex ARN:ADN.
Action | Applications | ||
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19101 RNase A |
Endoribonucléase qui dégrade l’ARNsb sur les résidus C et U* |
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Y9220L RNase H |
Prochainement | Endoribonucléase qui hydrolyse les liaisons phosphodiester de l’ARN hybridées à l’ADN |
L’activité de la RNase H dégrade l’ARN matriciel d’un complexe ADN:ARN, libérant ainsi l’ADNc simple brin comme matrice pour la synthèse du second brin d’ADNc |
Y9240L Inhibiteur de la RNase |
Prochainement | Inhibiteur non compétitif d’origine porcine de la RNase A, B, C ; n’inhibe pas l’activité de la RNase H. |
Protège l’ARN de toute dégradation ; communément utilisé de façon préventive dans les manipulations enzymatiques de l’ARN |
FAQ sur l’analyse d’ARN
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