therascreen BRAF RGQ PCR Kit CE

• Conforme à la directive européenne IVD 98/79/CE
• Test sensible et robuste pouvant détecter de faibles niveaux d’ADN mutant
• Système prêt à l’emploi et procédure simple
• Spécificité et sensibilité élevées grâce aux technologies de PCR ARMS et Scorpions

Le kit therascreen BRAF RGQ PCR est un kit prêt à l’emploi destiné à la détection des mutations somatiques de l’oncogène BRAF à l’aide de la technique de réaction en chaîne par polymérase (PCR) sur l’instrument Rotor-Gene Q 5plex HRM. Le gène BRAF encode l’homologue B1 de l’oncogène viral kinase V-raf murine sarcoma, un proto-oncogène agissant en aval de l’EGFR. Le kit permet la mesure qualitative des mutations somatiques de l’oncogène BRAF dans l’ADN génomique extrait d’échantillons fixés au formaldéhyde et inclus en paraffine (FFPE). (1)

Le kit therascreen BRAF RGQ PCR permet de détecter les mutations suivantes dans un bruit de fond d’ADN génomique de type sauvage. (1)

V600E (GAG) et V600E complexe (GAA)

V600D (GAT)

V600K (AAG)

V600R (AGG)

Le kit détecte la présence de V600E (GAG) et V600E complexe (GAA) mais ne les distingue pas l’une de l’autre. (1)

Le kit therascreen BRAF RGQ PCR utilise deux technologies, ARMS (système de mutation réfractaire par amplification) et Scorpions, pour détecter les mutations en PCR en temps-réel. (1) 

ARMS

L’amplification spécifique d’allèle ou de mutation s’effectue par le biais du système ARMS. La Taq ADN polymérase permet d’établir une distinction efficace entre un appariement et un mésappariement à l’extrémité 3' d’une amorce de PCR. Des séquences aux mutations spécifiques sont sélectionnées pour être amplifiées, même dans des échantillons où la majorité des séquences ne porte pas la mutation. Lorsque l’amorce est entièrement appariée, l’efficacité de l’amplification est maximale. Lorsque la base 3' est mésappariée, seule une amplification de faible bruit de fond se produit. (1)

Scorpions

La détection de l’amplification s’effectue par le biais de la technologie Scorpions. Les sondes Scorpions sont des molécules bi-fonctionnelles contenant une amorce de PCR qui comporte une liaison covalente avec une sonde. Le fluorophore de cette sonde interagit avec un quencher, lui aussi intégré à la sonde, qui diminue la fluorescence. Au cours d’une PCR, lorsque la sonde s’hybride à l’amplicon, le fluorophore et le quencher se séparent. La fluorescence du tube de réaction augmente. (1)

Le kit therascreen BRAF RGQ PCR permet de détecter les mutations suivantes dans un bruit de fond d’ADN génomique de type sauvage. (1)

• V600E (GAG) et V600E complexe (GAA)

• V600D (GAT)

• V600K (AAG)

• V600R (AGG)