Qproteome Cell Compartment Kit

Pour le fractionnement de protéines selon la localisation cellulaire

Product Details

Les cellules eucaryotes sont des systèmes hautement structurés, complexes et bien organisés. Le kit de compartiment cellulaire est conçu pour un fractionnement sous-cellulaire rapide et facile des cellules eucaryotes et tissus intacts. Grâce à l’ajout consécutif de différents tampons d’extraction à un culot cellulaire, il est possible d’isoler les protéines de façon sélective dans les différents compartiments cellulaires.

Performance

Le Qproteome Cell Compartment Kit permet la localisation simple et efficace de protéines de marqueur propres à un compartiment cellulaire à partir de cellules isolées (voir les illustrations et ) ou à partir d’échantillons de tissus (voir l’illustration ).

See figures

Séparation spécifique de protéines de marqueur.

Localisation de protéines dans des cellules dans diverses conditions de croissance.

Localisation de protéines dans des échantillons de tissus.

Principle

Le kit contient 4 tampons d’extraction, ce qui permet l’isolement séquentiel des protéines associées au cytosol, aux membranes, au noyau et au cytosquelette à partir de lysats cellulaires ou de tissus.

Procedure

Les 4 tampons d’extraction sont ajoutés consécutivement à un culot cellulaire puis les fractions correspondantes sont isolées par centrifugation (voir le schéma).

Dans un autre protocole pour les tissus, les échantillons sont simultanément homogénéisés et désintégrés à l’aide du TissueRuptor avant d’être traités comme le culot cellulaire.

Applications

Le fractionnement sous-cellulaire de protéines peut être utilisé pour l’enrichissement d’espèces peu abondantes ; pour définir la localisation sous-cellulaire d’enzymes, de protéines régulatrices et de protéines structurales ; et pour surveiller la redistribution compartimentée des biomolécules dans des conditions de base et de stimulation.

Supporting data and figures

Localisation de protéines dans des cellules dans diverses conditions de croissance.

Micrographies (volets supérieurs) des cellules HeLa [A] en conditions de croissance normale et [B] après 4 heures d’incubation avec de la staurosporine, un inducteur de l’apoptose. Les volets inférieurs montrent les transferts de western préparés après que les lysats cellulaires ont été traités avec le Qproteome Cell Compartment Kit. Les transferts ont été sondés avec un anticorps anti-cytochrome c. On sait que, au cours de l’apoptose, le cytochrome c est transloqué de l’espace intermembranaire mitochondrial au cytosol, un processus révélé par la détection du cytochrome c dans la fraction cytosolique des cellules apoptotiques.

Resources

FAQ

The Qproteome Cell Compartment Kit, the Qproteome Nuclear Protein Kit, the Qproteome Mitochondria Isolation Kit, and the PhosphoProtein Purification Kit are compatible with tissue samples. The respective protocol can be found in the respective handbook.

The Qproteome Mammalian Protein Prep Kit is also compatible with tissue, there is the QIAGEN Supplementary Protocol: Purification of protein from animal tissues using the Qproteome Mammalian Protein Prep Kit and the TissueRuptor™ available. For all these protocols the TissueRuptor is used.

FAQ ID -755

No, none of the buffers of the Qproteome Cell Compartment Kit contain reducing agents.

FAQ ID -824

Acetone precipitation recommended in the protocols for the Qproteome Protein Fractionation Kits leaves most proteins in a native state. Some proteins may partially denature when precipitating with acetone.

FAQ ID -807

We have not tested immunoprecipitation on protein fractions from the Qproteome Cell Compartment Kit. However, since Buffers CE1, CE2 and CE3 are native buffers, we would expect that they would work for this application. It might be a good idea to dilute the fractions 1:1 with a buffer already tested for immunoprecipitation to adjust to IP conditions. Buffer CE4 is strongly denaturing, so the final protein fraction 4 may not be used for immunoprecipitation.

FAQ ID -855

The following protocol is suitable for concentrating and desalting protein samples for downstream applications such as 2D-PAGE:

Add four volumes of ice-cold 100% acetone to the protein fraction and incubate for 15 minutes on ice
Centrifuge for 10 minutes at 12,000 x g in a pre-cooled microcentrifuge at 4°C
Discard the supernatant and air dry the pellet
Resuspend the pellet in an appropriate sample buffer required for the downstream application

You will find this protocol also in the handbooks for QIAGEN's QProteome Protein Fractionation Kits.

FAQ ID -1035

Endosomal, microsomal and lysosomal proteins will be present in membrane protein fraction 2, as organelles remain intact after addition of Buffer CE1 during the first fractionation step with the Qproteome Cell Compartment Kit.

FAQ ID -808

Soluble mitochondrial proteins will be present in membrane protein fraction 2 when using the Qproteome Cell Compartment Kit.

FAQ ID -839