QIAexpress Type IV Kit
Pour l’expression de haut niveau et la purification en une étape des protéines marquées à l’histidine sur l’extrémité N-terminale
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Cat. No. / ID: 32149
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Les QIAexpress pQE Vectors associent un promoteur du phage T5 fort (que l’ARN polymérase d’E. coli reconnaît) à un module de répression à double opérateur lac pour obtenir une expression de haut niveau, parfaitement régulée, des protéines recombinantes dans E. coli. La synthèse des protéines est efficacement bloquée en présence de hauts niveaux de répresseur lac et la stabilité des constructions cytotoxiques s’en trouve améliorée. Les pQE Vectors (consultez l’illustration pQE Vectors et le tableau) améliorent le positionnement du His-tag sur l’extrémité N- ou C-terminale de la protéine recombinante.
Élément | Description |
---|---|
1. Élément promoteur/opérateur optimisé | Comprend le promoteur du phage T5 et deux séquences d’opérateurs lac, qui accroissent la probabilité d’une liaison du répresseur lac et assurent une répression performante du promoteur T5 fort |
2. Site de liaison du ribosome synthétique RBSII | Pour une traduction performante |
3. Séquence codante du His-tag | 5' ou 3' vers le site de clonage multiple |
4. Codons stop de traduction | Dans tous les cadres de lecture pour une préparation pratique des constructions d’expression |
5. Deux terminateurs de transcription forts | t0 à partir du phage lambda, et T1 à partir de l’opéron rrnB d’E. coli, pour empêcher la transcription ininterrompue et garantir la stabilité de la construction de l’expression |
6. Origine de la réplication ColE1 | À partir de pBR322 |
7. Gène de la bêta-lactamase (bla) | Confère une résistance à l’ampicilline |
Les inserts codant les protéines d’intérêt sont clonés dans des constructions appropriées puis transformés en une souche d’E. coli adaptée à l’expression. L’expression est induite par ajout d’IPTG. Les constructions du QIAexpress Type IV Kit peuvent être transformées en E. coli, utilisées comme vecteur navette pour l’expression de protéines recombinantes dans des cellules d’insecte ou transfectées dans des cellules de mammifère.
Le QIAexpress Expression System permet une expression de haut niveau des protéines adaptée à de nombreuses applications, notamment :
Features | Specifications |
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ApplicationsFR | Protéomique |
Yield | < 50 % des protéines totales |
Special feature | Système complet, polyvalent, pour la purification en une étape |
Tag | Marqueur 6xHis-tag |
Processing | Manuel |
Start material | Lysat cellulaire |
N- or C-terminal tag | Marqueur N-terminal |