miScript miRNA PCR Arrays

miScript PCR Systemを用いたSYBR® GreenベースのリアルタイムPCRによるmiRNAのプロファイリング

Products

miScript miRNA PCR Arraysは分子生物学的アプリケーション用であり、疾病の診断、予防、あるいは治療に使用することはできません。
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miRNome V16

Cat. No. / ID:   331222

miRNome panels of miRNA assays in 96-well, 384-well, or Rotor-Disc formats
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miScript miRNA HC PCR Array

Cat. No. / ID:   331223

High-content array of assays for a pathway, disease, or gene family miRNAs; available in 384-well format
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miScript miRNA QC PCR Array

Cat. No. / ID:   331292

Array of quality control assays available in 96-well, 384-well, or Rotor-Disc format
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Pathway-Focused miScript miRNA PCR Array

Cat. No. / ID:   331221

Pathway- or disease-focused panels of miRNA assays in 96-well, 384-well, or Rotor-Disc formats

Features

  • 感度と特異性の高いmiRNAプロファイリング
  • パスウェイあるいは疾病に特異的なmiRNAあるいは全miRNome用PCRアレイ
  • 無料オンライン解析ツール

Product Details

miScript miRNA PCR Arrayはmature miRNAに特異的なforwardプライマー(miScript Primer Assays)で、生物学的に関連性のあるパスウェイ、疾病に特化したアレイやゲノムワイドなmiRNAのmiRNomeがあります。miScript miRNA PCR ArrayはmiRNAの検出や定量のためのmiScript PCR Systemを構成する製品です。cDNAはmiScript II RT KitとmiScript HiSpec Bufferを用いて調製し、miScript miRNA PCR ArrayとmiScript SYBR Green PCR Kitを用いたリアルタイムPCRでテンプレートとして使用します。

Performance

血清および血漿サンプルからバイオマーカーの発見

パスウエイにフォーカスしたmiScript miRNA PCR Array製品は逐次追加されており、生物学的プロセスにおけるmiRNAの役割についての新しい発見をサポートします。miScript miRNA PCR Arrayのコンテントは、アレイが最新で生物学的に適切であることを保証する当社独自の方法論を用いて選択されています。現在miRNA研究で現在最も関心の高い分野の一つとして、血清や血漿サンプルに存在するmiRNAの評価があります。最近、血清および血漿中で比較的安定した細胞外miRNAが発見されたことで、様々な疾患の非侵襲的バイオマーカーとして、これらmiRNAレベルの変化が注目されています。その結果、Serum & Plasma miScript miRNA PCR Arrayが開発されました。このアレイを用いて、血清と血漿に存在する84種類の最も関連性のあるmiRNAを迅速にプロファイリングできます(図“ 血清または血漿中の循環miRNAの発現解析”)。

1回のcDNA合成反応で全miRNomeをプロファイル

パスウエイに焦点を当てたアレイに加えて、最新のmiRNome miScript miRNA PCR Arrayもヒト、マウス、ラット、イヌを含む様々な種で入手可能です。1 µg未満のRNAで、ヒト全miRNomeを迅速にプロファイリングできます(図 “ 全miRNomeプロファイリング”)。miScript miRNA PCR Array中の各アッセイは、リアルタイムPCRによりmature miRNAを高い感度と特異性で検出することが実験的に検証されています。

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Principle

miScript PCR System は、SYBR GreenベースのリアルタイムPCRを用いて、高い感度と特異性でmiRNAの定量とプロファイリングを容易に実現します。miScript PCR Systemは、RNAをcDNAに変換するステップと 、続くリアルタイムPCRによりmiRNAを検出するステップをすべてカバーします。

miScript PCR Systemを用いたmature miRNAのプロファイリングには次のような製品が必要です:

miScript II RT Kit — シングルステップで簡単にcDNA合成を実現します。一回のcDNA合成で数種類のmiRNA検出に使用可能です。2種類のバッファーシステム(デュアルバッファーシステム)により、リアルタイムPCRを用いたmiRNA定量における特殊なニーズを満たすことができます。
miScript PreAMP PCR Kit and Primer Mixes — 限られた量のRNAで実験する場合、本キットによりオプションでのプレアンプリフィケーションステップを行なえます。
miScript SYBR Green PCR Kit — このキットには、QuantiTect SYBR Green PCR Master MixとmiScript Universal Primer (reverse プライマー)が入っています。 後者はmiScript Primer Assay あるいはmiScript miRNA PCR Arrayとの組み合わせで miRNAを検出できます。
miScript miRNA PCR Array — 最先端のmiScript miRNA PCR Arrayは、miRNomeパネルや生物学的に関連したパスウエイに焦点を当てたパネルで、mature miRNAに特異的なforwardプライマー(miScript Primer Assay)で構成されています。 

Procedure

miScript miRNA PCR Arrayを用いたmiRNA発現プロファイリングは、簡単かつ確実です。まずmiScript II RT Kit とmiScript HiSpec Buffer を用いてcDNAを調製します。次にcDNA、miScript Universal Primer、QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix、RNaseフリー水のプレミックスをmiScript miRNA PCR Arrayに添加します。3番目にリアルタイムPCR装置で反応を開始します。最後にmiScript miRNA PCR Array Data Analysis Toolを用いてデータを解析します。
miScript miRNA PCR Arrayプレートレイアウト

miScript miRNA PCR Arrayは96ウェル、384ウェル、Rotor-Disc 100フォーマットで入手可能です(図“ Pathway-Focused or miRNome miScript miRNA PCR Array レイアウト:プレートフォーマットA, C, D, F”、“  Pathway-Focused miScript miRNA PCR Array レイアウト:プレートフォーマットE, G”、“  miRNome miScript miRNA PCR Array and miScript miRNA HC PCR Array レイアウト:プレートフォーマットE, G”、および“  miScript miRNA PCR Array レイアウト: Rotor-Disc format R”)。各アレイには数種類のコントロールアッセイが入っています。これらのアッセイの目的は、以下の表に記載されています。

miScript miRNA PCR Arraysのコントロール
コントロール 目的
C. elegans miR-39 miScript Primer
Assay
外在性のSyn-cel-miR-39
miScript miRNA Mimic
を用いたデータ標準化
6 snoRNA/snRNA miScript Primer
Assays (miScript PCR Controls)
相対定量ΔΔCT
法を用いたデータの標準化
miRNA reverse transcription control
(miRTC) miScript Primer Assay
逆転写反応のパフォーマンスを評価
Positive PCR control (PPC) PCRパフォーマンスの評価

これらのコントロールに関する詳細はmiScript miRNA PCR Array Handbookをご覧ください。

miScript miRNA QC PCR Array プレートレイアウト

miScript miRNA QC PCR ArrayとリアルタイムPCRを用いて、複数のcDNAサンプルの品質評価が行なえます。miScript miRNA QC PCR Arrayは96ウェル、384ウェル、Rotor-Disc 100フォーマットで入手可能です(図“ miScript miRNA QC PCR Arrayレイアウト:プレートフォーマット A, C, D, F”、 miScript miRNA QC PCR Arrayレイアウト:プレートフォーマットE, G”、および“ miScript miRNA QC PCR Arrayレイアウト:プレートフォーマットRotor-Disc format R”)。各miScript miRNA QC PCR ArrayにはC. elegans miR-39 miScript Primer Assay、3 mature miRNA miScript Primer Assays(miR-16, miR-21, miR-191)、3 snoRNA miScript Primer Assays(SNORD61, SNORD95, SNORD96A)、miRTC miScript Primer Assay、およびポジティブPCRコントロールのreplicates が入っています。詳細はmiScript miRNA PCR Array Handbookを参照してください。96ウェルプレートおよびRotor-Disc 100フォーマットでは最高8種類のcDNAサンプルの品質管理が可能です。384ウェルフォーマットでは最高32種類のcDNAサンプルの品質管理が可能です。

miScript miRNA PCR Array Data Analysis Tool

miScript miRNA PCR Arrays用の使いやすい無料データ解析ソフトがオンラインで利用できます。各miScript miRNA PCR Arrayに専用のデータ解析ツールが付属しています。生のCT 値を入力すると、分析ツールが自動的にPCRアレイコントロールを分析し、∆∆CT 法を用いて相対定量を行ない、さまざまなフォーマットで結果を表示し、迅速にデータ解析が行なえます

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Applications

miScript PCR Systemを構成するmiScript miRNA PCR Arrayは以下のようなアプリケーションに最適です:

疾病およびパスウェイに特異的なmiRNAのプロファイリング
miRNomeプロファイリング
バイオマーカーの探索

Supporting data and figures

Resources

Brochures & Guides (4)
Simultaneously profile mRNA, miRNA and lncRNA using a simple, complete workflow
Kit Handbooks (3)

miScript II RT Kit

miScript SYBR Green PCR Kit

miScript miRNA PCR Arrays

miScript miRNA QC PCR Array

For SYBR Green-based, real-time PCR profiling of microRNAs using pathway-focused arrays, HC arrays, and miRNome arrays

Instrument Technical Documents (2)
For gene expression and genomic analysis
For pathway-focused miRNA or miRNome analysis
Download Files (1)
Data analysis file for miScript miRNA PCR Array All miRNA QC (96-well plate, Rotor-Disc 100)
Catalog number- 331221
Pathway number- MIXX-989Z

FAQ

Can miScript miRNA qPCR Assays detect single nucleotide difference between miRNAs?
Yes. With our patent pending proprietary technology, miScript miRNA qPCR Arrays and Assays can distinguish miRNAs that differ by only one single nucleotide.
FAQ ID -2723
Will pipetting error affect the miRNA qPCR Assay results?
The passive reference dye, ROX in the miScript PCR master mix is used by real-time PCR systems to normalize variation from well to well. Therefore, these systems tolerate volume variations caused by pipetting error and evaporation.
FAQ ID -2728
Do I need the sequence specific miRNA primers in the RT step of the miRNA qPCR Assays?
No. Because the miScript miRNA qPCR assay technology uses universal reverse transcription in the RT step, sequence specific miRNA primers are not needed in this step. Therefore, cDNA obtained from universal RT can be used for any miScript miRNA expression analysis qPCR assay or PCR array.
FAQ ID -2725
How can I prevent the evaporation of reaction volume from the wells in the miScript miRNA PCR array?
Be sure to carefully and completely seal the PCR plate with the optical thin-wall 8-cap strips or the optical adhesive film before placing it into your thermal cycler. Also, be sure to use a compression pad when using an optical film seal as directed by the manufacturer of your real-time PCR instrument.
FAQ ID -2729
Why did the real-time PCR yield Ct values < 12?
You probably used too much template. Try less input RNA for reverse transcription especially if the higher end of the recommended range had been used previously. Or use a smaller volume of template per PCR reaction or use diluted template, but do not use less than 1 µl of template per each 25-µl miRNA PCR array reaction. Remember to use the same volume of template in each reaction.
FAQ ID -2727
Can miScript miRNA qPCR Assays be used for pre-miRNA detection?
No. miScript miRNA PCR Arrays and miScript Primer Assays are designed to measure exclusively the expression of mature miRNA, not pre-miRNA. To measure miRNA precursors use miScript Precursor Assays available through the QIAGEN GeneGlobe assay search portal.
FAQ ID -2724
Can I use total RNA for the miRNA PCR Arrays or Assays?
Yes, you can. In fact, total RNA is the recommended starting material for the miScript PCR System. We recommend using the miRNeasy Mini Kit (217004) to isolate total RNA for use with the miScript PCR System.
FAQ ID -2726