PAXgene Tissue DNA Kit

PAXgene Tissue Containers で固定、保存した組織サンプルは、続いてmiRNA、RNA、DNAを精製することは勿論、パラフィン包埋し、病理学研究にも使用できます。PAXgene Tissue DNA Kitは、PAXgene Tissue Containersで固定と安定化を行なった組織からのDNA精製を実現します。精製は、シリカベースのDNA精製テクノロジーを用いてスピンカラムフォーマットで行なわれます。本キットはContainerと併用して採取、固定、安定から分子解析のための高品質DNA精製までをカバーするプレアナリティカルなトータルソリューションを提供します。

最新の情報はPreAnalytixのウェブサイトよりご確認ください。

従来の組織学分野で使用されている現在の組織固定法は、分子解析に使用するには限界があります。ホルムアルデヒドを含む固定剤が生体分子にクロスリンクし、核酸およびタンパク質を変性します。組織の固定、保存、および処理中に、核酸の分解がクロスリンクにより生じます。クロスリンクを完全に除去できないために生じる化学的な変化は、定量PCRおよびRT-PCRなどの感度の高いダウンストリームアプリケーションにおいて阻害の原因になります。遺伝子解析と従来の病理学研究を同一検体から行なうためには、分子の安定化および形態保存を実現する方法が必要です。

PreAnalytiXはこのようなニーズにあったPAXgene Tissue Systemを開発しました。本システムは、組織採取用容器（ヒト組織切片の採取、安定化、保存、輸送用PAXgene Tissue Container）と、トータルRNA、DNA、miRNAの精製用キットから構成されています。PAXgene Tissue Containerは、病理組織学のための組織固定化を行ない、また同一サンプルから分子解析用の高品質核酸の精製が可能です。この組織の固定および安定化法により、組織形態は保存され、ホルマリン固定組織で見られるようなクロスリンキングや分解のない核酸が得られます。

ゲノムDNAの精製のためには、PAXgene Tissue Containers で組織の採取と安定化とPAXgene Tissue DNA Kitを用いたDNAの分離と精製を含むシステムが必要です。

PAXgene Tissue Containersは2種類の試薬がそれぞれ充填された2つのchamberで構成されています。PAXgene Tissue Fixは迅速に組織に浸透し固定します。固定後にPAXgene Tissue Fixから組織を取り出し、同じ容器の2つ目のchamber に入っているPAXgene Tissue Stabilizerに組織を移します。組織をPAXgene Tissue Stabilizerで保存すると、組織サンプルの核酸と形態は室温で最低3日、最高7日間、2～8℃で最低2週間、最高8週間安定です（組織タイプに依存）。-15～-30°Cで少なくとも26ヶ月間の保存も可能で、組織形態や核酸の品質には悪影響はありません。

安定化したサンプルは、組織研究用にパラフィン包埋ができます。パラフィン包埋の前か後で、PAXgene Tissue で固定し、パラフィン包埋したサンプルから核酸を分離できます。 

PAXgene Tissue DNA Kitは、PAXgene Tissue Containersで固定と安定化を行なった組織からのゲノムDNA精製に3種類のプロトコールを準備しています。

組織サンプルは溶解バッファー、Buffer TD1で溶解、proteinase Kで分解します。バッファー条件を、結合バッファーであるBuffer TD2とエタノールで調節して、DNA結合条件を最適にし、ライセートをPAXgene DNA Spin Columnにアプライします。遠心操作中にDNAは選択的にシリカメンブレンに結合し、夾雑物は洗い流されます。残存する夾雑物および酵素阻害物質は洗浄バッファー、TD3 とTD4による2回の洗浄ステップで効率的に除去され、DNAは低塩濃度の溶出バッファー、 Buffer TD5で溶出し、すぐに使用できます（図“ The PAXgene Tissue DNA操作”）。

精製したDNAは次のような様々なダウンストリームアプリケーションに最適です。

PCRおよびリアルタイム定量PCR

サザンブロット

薬理ゲノミクス研究

SNPディスカバリーとSNPジェノタイピング