PCRの新たな絶対–デジタルPCR　

一言で言うと、デジタルPCRは、希少なシークエンス、コピー数多型および微生物ターゲットの検出、リキッドバイオプシー由来を含むまれな突然変異の定量、シングルセル分析、ウイルス量の測定、遺伝子発現の分析、次世代シークエンシング（NGS）ライブラリーの定量などに使用されます。

PCRとデジタルPCRの違いは、エンドポイント、すなわち従来のPCRが、定性的または半定量的分析を提供するのに対し、dPCRは絶対定量を提供することです。デジタルPCRはより速く、より正確で再現性が高く、マルチプレックス機能を備えていますが、より大きな初期投資も必要です。

デジタルPCRの利点として、標準やリファレンス曲線を必要としないターゲットの絶対定量、PCR阻害物質に対する高い耐性、わずかな変化の検出に必要な高い精度、高い感度、低い検出限界、また特に、異なる研究室間での高い再現性などがあります。

デジタルPCRの欠点は、qPCRに比べてダイナミックレンジがやや狭いことです。この方法は、大きなアンプリコンには理想的ではありません。

QIAcuity装置のソフトウェアでは、シールのないプレートの読み取りと処理はできません。ドライランしたい場合は、密封したプレートをQIAcuity Software Suiteにセットアップし、使用してください。

デジタルPCRの精度は、dPCRシステムやアプリケーションによって異なります。dPCRとqPCRの精度と感度を比較する比較試験で、dPCRはレプリケートの標準偏差を3分の1に低下することが示されました。遺伝子変異検出の感度に関していえば、qPCRは10%の変異率で、dPCRは0.1%の変異率で、信頼性の高い定量ができなくなります。

デジタルPCRでは、オン/オフ、またはイエス/ノーのバイナリ結果を得ることができるので、デジタルPCRと呼ばれます。デジタルアッセイは、さまざまな可能性ではなく、2つのシグナルを区別することしかできません。つまり、物事は黒か白かのどちらかであり、白黒混ざったグレーではありません。特にデジタルPCRでは、センサーが陽性パーティションと陰性パーティションを区別し、ターゲットがパーティションに存在するかどうか、イエスかノーで答えを出します。

弊社のQIAcuityデジタルPCRシステムは、ナノプレートベースのテクノロジーで開発されており、ドロップレットデジタルPCR（ddPCR）テクノロジーに比べて大きなメリットがあります。dPCRナノプレートに一体化した固定パーティションは、ddPCRメソッドで見られるようなサイズと合体の変動を防ぎます。さらに、ナノプレートのサンプルのすべてのパーティションを同時に読み取るので、読み取りが速くなります。ナノプレートは、qPCRと同じようにユーザーフレンドリーでピペッティングが簡単なだけでなく、フロントエンドの自動化にも対応しています。最も重要なことは、正しく密封したナノプレートが、サンプルの蒸発と、ウェルからウェルへの汚染を防ぐことです。分割、熱サイクリング、イメージングはすべて、完全自動化した装置に一体化されており、他のいくつかのデジタルPCRシステムでは4時間以上かかるのに対し、2時間未満で結果を得ることができます。さらに、スケーラブルな構成とより高度な多重化機能により、QIAcuityデジタルPCRはあらゆる種類のラボやアプリケーションの要件に簡単に適応できます。QIAcuity Software Suiteを使用すると、デジタルPCR実験、サンプル、反応ミックスを定義し、ナノプレートに割り当てて、QIAcuity機器に転送できます。ラン後、データを分析し、レポートを作成し、データをエクスポートしてリモート分析ができます。

QIAcuity機器ソフトウェアでは、シールのないプレートの読み取りと処理はできません。ドライランしたい場合は、密封したプレートをQIAcuity Software Suiteにセットアップし、使用してください。

弊社のQIAcuityデジタルPCRシステムは、ナノプレートベースのテクノロジーで開発されており、ドロップレットデジタルPCR（ddPCR）テクノロジーに比べて大きなメリットがあります。dPCRナノプレートに一体化した固定パーティションは、ddPCRメソッドで見られるようなサイズと合体の変動を防ぎます。さらに、ナノプレートのサンプルのすべてのパーティションを同時に読み取るので、読み取りが速くなります。ナノプレートは、qPCRと同じようにユーザーフレンドリーでピペッティングが簡単なだけでなく、フロントエンドの自動化にも対応しています。最も重要なことは、正しく密封したナノプレートが、サンプルの蒸発と、ウェルからウェルへの汚染を防ぐことです。分割、熱サイクリング、イメージングはすべて、完全自動化した装置に一体化されており、他のいくつかのデジタルPCRシステムでは4時間以上かかるのに対し、2時間未満で結果を得ることができます。さらに、スケーラブルな構成とより高度な多重化機能により、QIAcuityデジタルPCRはあらゆる種類のラボやアプリケーションの要件に簡単に適応できます。QIAcuity Software Suiteを使用すると、デジタルPCR実験、サンプル、反応ミックスを定義し、ナノプレートに割り当てて、QIAcuity機器に転送できます。ラン後、データを分析し、レポートを作成し、データをエクスポートしてリモート分析ができます。

QIAcuity EightプレートdPCR装置を使用している場合は、24ウェルナノプレートでは最大312サンプル、96ウェルナノプレートでは最大1248サンプルを分析できます。詳細については、こちらをご覧ください。