QIAamp Fast DNA Tissue Kit

PCR または次世代シークエンシングを用いるジェノタイピングや他のDNA 分析では、測定に十分な量、かつ高品質なDNA が必要です。組織から高品質なDNA を得る際に重要なポイントは、サンプルの溶解です。特に繊維組織やその他の硬い組織は溶解が難しく、長時間にわたる煩雑な作業を実施しても低収量・低品質なDNA しか抽出できないことがよく見られます。
QIAGEN テクノロジーに基づいたQIAamp Fast DNA Tissue Kit は、革新的な破砕チューブを採用することにより、全体の作業時間を大幅に短縮でき、圧倒的な収量の改善に成功しました。

QIAamp Fast DNA Tissue Kit は新開発の機械的破砕、化学的、酵素溶解を組み合わせたキットです。キットには破砕チューブが含まれており、従来法よりも効率よい組織破砕を行なうための特殊形状のステンレス製ビーズがあらかじめ各チューブ内にセットされています。最初に組織サンプルと試薬混合物をチューブに加え、市販されているボルテックス（適切なアダプターを使用）や、TissueLyser II やLT などのビーズミルでホモジナイズを行ない、そのまま同じチューブで溶解を行ないます。そしてDNA はライセートから実績のあるQIAamp テクノロジーを用いて抽出されます。このサンプルの前処理により、トータルのDNA 抽出の工程が、わずか30 分にまで短縮できます。

QIAamp Fast DNA Tissue Kit の機械的破砕ステップは、従来の方法と比べ、DNA 抽出のトータル時間を短縮するのみならず、収量も改善します。QIAamp Fast DNA Tissue Kit の全溶解プロトコールは、より多くの細胞をバラバラにし、結果としてDNA の収量を増大します。異なる組織タイプからのDNA 収量をQIAxpert 、または、蛍光定量的な分析で評価しました。また、本キットを用いた収量は、他の機械的な破砕を含む方法と比較しても、最も作業時間の短いプロトコールにも関わらず、有意に優れた収量を示しました（図2）。わずか1 mg の組織からも高い収量かつ高品質のDNA を抽出することが可能です。

長いリード長や、バイオインフォマティクスによるアセンブリの工程のためには、多くのNGS アプリケーションにおいて、長鎖DNA （>10 kb）が必要になります。従来の破砕方法は剪断を通してDNA の断片化が起こる可能性があります。QIAamp Fast DNA Tissue Kit により精製される大部分のDNA は25～50 kb ですが、その他のキットにおいては数kb と高い断片化が起きているのが分かります。従って、本キットはどのようなPCR またはNGS においても、非常に適した精製キットといえます。

PCR とNGS のような分子技術は、実験用試料の複合から今まで知られていなかった知見を明らかにしています。
これらの技術において信頼できる結果を得るためには、十分な量の高品質なDNA を得ることが重要です。
溶解の難しい繊維組織や硬い組織から直接十分な量のDNAを得ることは、大変に挑戦的なことといえます。
この問題を解決するために我々の新しいQIAamp Fast DNA Tissue Kit は、機械的破砕、化学的溶解、酵素組織溶解を組み合わせています。
これにより標準的な方法と比較して5～10 倍程度の高いDNA 収量を実現しています。
トータルDNA を抽出するまでの前処理時間がわずか30 分程度まで減少でき、更にPCR とNGS アプリケーションに適した高い品質のDNA を得ることができます。

QIAamp Fast DNA Tissue Kit は、サンプルのホモジナイズのために機械的破砕、化学的溶解、酵素組織溶解を組み合わせています。付属のTissue Disruption Tubes には、撹拌時に効果的に組織を破壊するように特別に形成されたビーズが含まれています。卓上ボルテックスでわずか5 分、または高出力の破砕機を用いるとわずか30 秒で組織のホモジナイズが行なえます。至適化されたケミストリーは組織のホモジナイズとDNA の安定化を組織破砕時に同時に行ないます。酵素消化バッファーにはプロテイナーゼK も含まれ、短時間のインキュベーションを行なうステップを含みます。機械的ホモジナイズに影響することもありません。その後、確率されたQIAamp 技術を用いてゲノムDNA は精製されるため、PCR やシークエンシングのためのダウンストリームアプリケーションに適した純度の高いDNA を得ることができます。更にQIAamp Fast DNA Tissue Kit はQIAcube によるサンプル処理の自動化が行なえます。

QIAamp Fast DNA Tissue Kit はPCR または次世代シークエンシングを用いるジェノタイピングや他のDNA 分析のための高い収量で、高純度なDNA を提供します。