Cat. No. / ID: 204156
QuantiFast SYBR Green RT-PCR KitはSYBR Green I 検出を用いた1ステップリアルタイムRT-PCRで迅速かつ特異的にRNAターゲットを定量します。Q-bondテクノロジーと至適化済みの即使用可能なマスターミックスにより、短いRamping Time機能を持つ高速サイクラーだけではなく標準的なサイクラーで短時間でリアルタイムRT-PCRを実現します。ホットスタートと独自のqRT-PCRバッファーシステムの組み合わせは、RNAターゲットのリアルタイム定量を高い特異性と感度で実現します。QuantiFast SYBR Green RT-PCR Kitはわずか10分で効率的なcDNA合成を実現する至適化済みRT Mixも付いています。マスターミックスは2~8 ℃で保存でき、簡便に取り扱えます。
Fastサイクリングモードで使用した他のリアルタイムRT-PCRキットに比較して、QuantiFast SYBR Green RT-PCR Kitでは卓越した特異性と感度の高い結果が得られます(図" 特異的な1ステップRT-PCR結果")。RT-PCR時間を最大60 %まで短縮(図" PCR時間を顕著に短縮")するため、結果をより速く得られます。従って、サンプル処理数を大幅に増やしたり、他の実験者と1 台のサイクラーを効率的に共有できます。
1ステップRT-PCRの結果は2ステップRT-PCRの結果と同等です(表参照)。
平均CT値 | ||
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cDNA/RNA量 | QuantiFast SYBR Green PCR Kit(2ステップRT-PCR) | QuantiFast SYBR Green RT-PCR Kit(1ステップRT-PCR) |
10 ng | 20.27 | 20.11 |
1 ng | 23.44 | 23.46 |
0.1 ng | 27.18 | 26.86 |
NTC | 45.00 | 45.00 |
QuantiFast SYBR Green RT-PCR Kitは、数段階に対数希釈したテンプレート液でターゲットの正確な定量を実現します(図" 107倍希釈したテンプレートの検出")。低コピー数のターゲットのわずかな差異も明確に区別することができます。
QuantiFast SYBR Green RT-PCR Kitでは、標準的なサイクラー、高速サイクラーともに、広範なダイナミックレンジで非常に高感度、特異的な結果が得られます。マスターミックス中の蛍光色素SYBR Green Iは、ターゲットに特異的な標識プローブを合成しなくても多数の異なるターゲットを解析できます。新規PCR添加剤のQ-Bondを含有する特別に開発された高速RT-PCR用バッファーにより、変性、アニーリングおよびエクステンション時間も顕著に短縮されます(図" プライマーの高速なアニーリング")。PCRバッファー中のK+およびNH4+のイオン配合比により、プライマーの特異的なアニーリングが促進され、高いPCR効率と感度を実現します(図" 特異的なプライマーアニーリング")。さらに、HotStarTaq Plus DNA Polymeraseで活性化に必要な時間は95℃ではわずか5分で、厳密なホットスタートを行なえるため、非特異的な産物の形成を抑えます。至適化済みのQuantiFast RT Mixはわずか10分でcDNA合成を実現します。
成分 | 特長 | 利点 |
---|---|---|
HotStarTaq Plus DNA Polymerase | 95℃、5分間の活性化 | 室温での定量PCRのセットアップ |
QuantiFast SYBR Green RT-PCR Buffer | NH4+/K+イオンの配合バランス | 特異性の高いプライマーのアニーリングで信頼性の高いPCR結果 |
ユニークなQ-Bondを含む | PCR反応時間が短縮されるため、迅速に結果が得られ、1日あたりの反応数を増やせる | |
SYBR Green I色素 | ニ本鎖DNAに結合して強い蛍光シグナルを発生 | 高感度な定量 |
ROX色素 | Applied Biosystems社およびオプションのAgilent社の装置で蛍光シグナルを補正 | サイクラーでの正確な定量にはROX色素が必要。他のリアルタイムサイクラーでの反応を妨害しない |
QuantiFast RT Mix | RNAへのアフィニティーが高い逆転写酵素の特殊なブレンド | 複雑な二次構造でも、わずか10分でRNAを転写可能 |
QuantiFast SYBR Green RT-PCR Kitは反応条件やサイクリング条件の至適化が不要で即使用可能なマスターミックスです。プライマーおよびDNAテンプレートをPCRマスターミックスに添加するだけで、すぐに反応を開始することができます。ハンドブックに記載されているプロトコールに従うだけで、全てのリアルタイムサイクラーで迅速で正確な結果が得られます。
1ステップリアルタイムRT-PCRで最適な結果を得るためには、QuantiFast SYBR Green RT-PCR KitとQuantiTect Primer Assaysを組み合わせて使用することをお薦めします。これらは、ヒト、マウス、ラット、その他の生物種の全ての遺伝子に対応するバイオインフォマティックスで検証済みのプライマーセットです。アッセイはGeneGlobe Webポータルサイトで簡単にオーダーできます。
QuantiFast SYBR Green RT-PCR KitはRNAターゲットの遺伝子発現解析に使用できます。QuantiFast SYBR Green RT-PCR KitsはApplied Biosystems、Bio-Rad、Cepheid、Eppendorf、RocheおよびAgilent社製などの市販されている全てのリアルタイムサイクラーに対応します。Rotor-Gene Qおよびその他のRotor-Geneサイクラーを使用する場合は、これらの高速サイクリング用に特別に開発されたRotor-Gene SYBR Green RT-PCR Kitの使用をお勧めします。
Features | Specifications |
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ApplicationsJA | SYBR Green-based, real-time, one-step RT-PCR |
Single or multiplex | Single |
Real-time or endpoint | Real-time |
SYBR Green I or sequence-specific probes | SYBR Green I |
Reaction type | Real-time and one-step RT-PCR |
Thermal cycler | All real-time cyclers (e.g. LC, RG, ABI) |
Sample/target type | RNA |
With or without ROX | With ROX |