クローニングおよびDNA組換え

テンプレートDNAを適切なプラスミドベクターにクローニングする前に、末端修飾が必要になる場合があります。クローニング用に同定したDNAは通常、制限酵素消化またはPCR増幅によってソースから分離されます。 Klenow Fragment、T4 DNAポリメラーゼ、T4ポリヌクレオチドキナーゼなどの特殊な酵素は、3’または5’末端を修飾し、DNA断片とベクターの共有結合を改善します。

次のクローニングステップは、ベクターとインサートの末端をアニーリングするのに適した酵素を用いたライゲーションです。

テーリングは通常、TAクローニングに使用するT-ベクターの調製や、TAクローニングに使用するハイフィデリティポリメラーゼ（Taqではない）によって生成したPCR産物をAテーリングするために行われます。Taq DNAポリメラーゼ（Taq）による増幅産物は、すでにA-テーリングされています。

シークエンシングおよびライゲーション非依存性クローニング（SLIC）はエキソヌクレアーゼの酵素活性を利用します：

次世代シークエンシングを目的とするライブラリは、断片化したDNAからスタートします。酵素の作用により、クローニングステップが完了します。

遺伝子合成は、長い相補的オーバーラップ領域を持つオリゴデオキシヌクレオチドの結合に基づいています。