Taqsは好熱性ですが、最初から熱いのが得意なTaqもあります
ほとんどのin vitro増幅アプリケーションでは、ポリメラーゼ連鎖反応（PCR）に熱安定酵素を使用します。最もよく使われているPCR酵素はTaq DNAポリメラーゼです。Taq DNAポリメラーゼは、70°C以上の温度で生育する好熱性の真正細菌であるThermus aquaticusに由来します。そのため、Taq DNAポリメラーゼの最適な酵素活性が約72°Cで得られるのです。
PCR？それともhot-start PCR？
通常のTaqポリメラーゼの至適温度は72℃で、この酵素は37℃付近から活性を示します。この低温での活性はかなり高く、PCRの最初の低温段階で非特異的増幅やミスプライミングを起こしやすいという欠点があります。PCRの自動化も必要な場合は、hot-start Taqポリメラーゼの使用を検討してください。
Hot-startポリメラーゼは通常のTaqとは異なり、室温では反応しません。Hot-start PCR技術は、従来のPCRと同じ原理ですが、最初の変性ステップが完了するまで酵素活性は抑制されています。これにより、非特異的結合やミスプライミングは最小限に抑えられ、特異性が向上します。さらに、この技術は室温で反応をセットアップできるため非常に便利であり、PCRの自動化が可能になります。特異的な標的の増幅に必要な反応成分が非特異的増幅によって枯渇するのを妨げるので、感度が改善されることもあります。
すべてのTaqポリメラーゼは、以下の用途に適しています。
通常のPCR、または自動化やハイスループットPCRアプリケーションに適したhot-start酵素を酵素の特性から選択してください。
| 酵素 | 特性 | 付属品 | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Hot-start (x 分、95°C) |
アンプリコンサイズ | 伸長効率 | 5’-3’ エキソヌクレアーゼ |
PCRバッファー | ローディングバッファー | ||
| P7250L Taq-B (Taq) |
近日発売 | ✘ No | <5 kb |
72°Cで2–4 kb/分 |
✔ Yes | ✘ No | ✘ No |
| P7620L TaqIT *(Stoffel) |
近日発売 | ✘ No | <7 kb | 72°Cで2–4 kb/分 |
✘ No* | ✔ Yes | ✘ No |
| 201203 Taq |
✘ No | <7 kb | 72°Cで2–4 kb/分 |
✔ Yes | ✔ Yes + Q‑Solution | ✔ Yes | |
| 201223 Taq PCR Core Kit |
✘ No | <7 kb |
72°C で2–4 kb/分 |
✔ Yes | ✔ Yes + dNTPs | ✔ Yes | |
| 203123 AllTaq PCR Core Kit |
✔ Yes（2分） | <9 kb | 68°Cで1 分/kb |
✔ Yes | ✔ Yes + dNTPs | ✔ Yes | |
| 203203 HotStarTaq |
✔ Yes（15分） | <7 kb | 72°Cで2–4 kb/分 |
✔ Yes | ✔ Yes + Q‑Solution | ✘ No | |
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