Enzymes, NGS, Black male pipetting in front of computer screen in a laboratory environment
分子生物学用酵素

RNA解析

RNAのすべて：増幅、シークエンシング、ライゲーション、ラベリング　

遺伝子発現のダウンストリーム解析に、RNAを操作する一連の酵素を利用できます。逆転写酵素は、転写産物から相補的DNA（cDNA）を生成します。クローニングや定量研究用に、cDNAをラベリングまたは増幅できます。RNAリガーゼは塩基、標識、アダプターを結合し、RNAポリメラーゼはリボヌクレオチドを付加し、リボヌクレアーゼはそれらを除去します。 

増幅によってRNAを検出し、操作します

逆転写酵素は、元のRNAテンプレートに相補的なDNA（cDNA）鎖を重合できる酵素です。RNAはRNaseによる分解を受けやすいため、逆転写酵素を用いてcDNAを生成することで、mRNAを扱う際の問題を克服できます。cDNAは、遺伝子発現解析などのRNA研究のさまざまなダウンストリームアプリケーションで安定したテンプレートになります。cDNAテンプレートの増幅には、通常のPCR、qPCR、ワンステップRT-qPCR、または等温法を選択できます。増幅後は、従来の酵素プロトコルを用いたクローニングや、T4 DNAポリメラーゼの3’→5’エキソヌクレアーゼ活性を利用したライゲーション非依存型クローニングを行うことができます。 

すべての逆転写酵素（RNA依存性DNAポリメラーゼ）を以下に使用できます。

    RNase H (+/-)
 特殊なアプリケーション
P7600L
EnzScript		 近日発売  マイナス 長いcDNAや完全長cDNAの割合が高いライブラリーに。RNA-Seqなど、
テンプレートの切り替えが必要なアプリケーション
P7720L
StableScript		 近日発売

マイナス

長いcDNA向け；プロセス性の改善、インヒビター耐性、耐熱性の向上
（最適温度55℃）
205111
Omniscript Kit
 プラス マイクロアレイ用ラベリング、幅広い量のRNAの
逆転写用に特別に設計、最適化されたバッファー、RNase Hステップ不要

RNAポリメラーゼとリガーゼ

RNAポリメラーゼ、より具体的にはDNA依存性RNAポリメラーゼは、DNAテンプレートからRNAを合成する酵素です。ポリ（A）ポリメラーゼは、一本鎖RNAをプライマーとして、アデニン残基をRNAの3’末端に取り込む触媒作用により、RNAにポリ（A）テールを付加します。 

T4 RNAリガーゼは、特にハイスループットRNAシークエンシングやマイクロアレイのような手順のアップストリームでのRNA分析に有用な酵素です。T4 RNAリガーゼ1および2は、隣接する3'-OHおよび5'-PO4ポリヌクレオチドを結合することにより、RNAのラベリング、環状化、分子間ライゲーションを行うことができる酵素です。T4 RNAリガーゼ1によるRNA 3'末端へのアダプターの結合は、RT-PCRとハイスループットシークエンシングによるRNA定量と探索のための有用な最初のステップです。

    作用 アプリケーション
P7180L
T7 RNA Polymerase		 近日発売  DNAテンプレートから5’→ 3’方向にRNAを合成、
T7プロモーターに特異的。
  • in vitro mRNA合成
  • RNAプローブのラベリング
  • RNA研究用RNAの生成
  • アンチセンスRNAによる発現制御
  • sgRNAの合成
P7460L
Poly(A) Polymerase		 近日発売

ATPからRNAの3’-OHへのAMP付加を触媒し、
ポリ（A）鎖RNAを生成
  • ATPまたはコルジセピンでRNAの3’ラベリング
  • RNAのポリ(A)鎖付加
  • ポリ(A)鎖は、
    真核生物細胞に導入されたRNAの翻訳を促進
 L6050L
T4 RNA Ligase 1		 近日発売 一本鎖RNAリガーゼ、一本鎖
DNA分子も結合
  • 一本鎖RNAやDNAのライゲーション
  • 一本鎖RNAまたはDNAの3'末端ラベリング
L6080L
T4 RNA Ligase 2 		 近日発売 dsRNAのニックのライゲーション、RNAの3’-OHを
二本鎖ハイブリッドのDNAの5’-PO4にライゲーション可能
  • 複数のオリゴヌクレオチドのテンプレート結合
  • 部位特異的
    修飾や標識を含むRNAの合成
  • dsRNAのニックライゲーション

  • DNA/RNA二重鎖のDNAの5’-PO4へのRNAの3’-OHのライゲーション

L6070L
T4 RNA Ligase 2
(Truncated） 

 近日発売
事前にアデニル化した5’リン酸（DNAまたはRNA）
とRNAの3’ヒドロキシ基の間のホスホジエステル結合形成を触媒
  • 事前にアデニル化した5’ DNA
    と3’水酸基RNAとのリンカーリゲーション
  • 低分子RNAのクローニングとシークエンシング

RNAの消化とRNAの保護

酵素RNase Aを用いるリボヌクレアーゼ保護アッセイ（RPA）は、転写産物の相対量または絶対量を決定し、mRNA末端やイントロン/エクソン境界をマッピングするために用いられる手法です。

一塩基置換は、RNA：DNAヘテロ二本鎖の一塩基ミスマッチのRNase A開裂が関与するシンプルな酵素法によって、検出と場所の特定が可能です。

    作用 アプリケーション
19101
RNase A		    ssRNAをCおよびU残基で分解するエンドリボヌクレアーゼ*
  • 転写産物の相対量または絶対量を決定
  • mRNA末端やイントロン/エクソン境界のマッピング（RPA）
  • DNAまたはRNAの一塩基突然変異のマッピング
  • プラスミドおよびゲノムDNA調製物からのRNA除去
  • 組換えタンパク質調製物からRNA除去
Y9220L
RNase H		 近日発売 DNAにハイブリダイズしたRNAのホスホジエステル結合
を加水分解するエンドリボヌクレアーゼ		 RNase Hの活性により、DNA：RNA複合体
のRNAテンプレートを分解し、
第2鎖cDNA合成のテンプレートとして一本鎖cDNAを放出します。
Y9240L
RNase Inhibitor		 近日発売 ブタ由来のRNase A、B、Cの非競合的阻害剤。
RNase H活性は阻害しません。		 RNAを分解から保護します。RNAの酵素的操作における予防
措置として一般的に使用
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RNA分析に関してよくある質問

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