ライゲーション計算ツール

5 x 100 μL of T4 DNA Ligase 5U/ μL, 5 x 200 μL 10x T4 Ligation Buffer, 5 x 80 μL of ATP Solution (25mM), 5 x 200 μL of 50% PEG Solution. Storage temperature: Keep at -20°C.

PLN 847.00

CAT NO./ID P7060L

Klenow Fragment (2500 U)

2500 U of Klenow Fragment (0.5 mL at 5000 U/mL) and 10x Blue Buffer (1 x 1.5 mL)

PLN 2,362.00

CAT NO./ID EN32-050

20 µL x 250 U/µL. Storage temperature: -20°C without a defrost cycle; -80°C for long storage. Stable at -20°C for at least 12 months. No loss in activity was observed after 8 weeks of incubation at 37°C.

PLN 670.00

CAT NO./ID Y9140-LC-L

End-Repair Mix (low concentration)

For 200 low-concentration DNA reactions. End-Repair Mix 1X (0.20 mL), 10X End-Repair Buffer (1 x 1.5 mL) and 1 mM dNTP solution (0.5 mL).

PLN 2,356.00

CAT NO./ID 203123

AllTaq PCR Core Kit (250 U)

50 µl AllTaq Polymerase (5 U/µl), 1.2 ml AllTaq PCR Buffer (5x), 55 µl dNTP Mix (10 mM each), 200 µl Template Tracer (25x), 50 µl Master Mix Tracer (125x), 2 ml Q-Solution (5x), 1.2 ml MgCl2 (25 mM), 1.9 ml RNase-Free Water

PLN 1,251.00

CAT NO./ID 201203

Taq DNA Polymerase (250 U)

250 units Taq DNA Polymerase, 10x PCR Buffer, 10x CoralLoad PCR Buffer, 5x Q-Solution, 25 mM MgCl2

PLN 971.00

CAT NO./ID 19101

RNase A (17,500 U)

2.5 ml (100 mg/ml; 7000 units/ml, solution) Unit definition: That amount of enzyme causing the hydrolysis of RNA at a rate such that k (velocity constant) equals unity (Kunitz units) at 25°C and pH 5.0.

PLN 1,721.00

CAT NO./ID 203203

HotStarTaq DNA Polymerase (250 U)

250 units HotStarTaq DNA Polymerase, 10x PCR Buffer, 5x Q-Solution, 25 mM MgCl2

PLN 1,206.00

CAT NO./ID 205111

Omniscript RT Kit (50)

For 50 reverse-transcription reactions: 200 units Omniscript Reverse Transcriptase, 150 µl 10x Buffer RT, 100 µl dNTP Mix (contains 5 mM each dNTP), 1.1 ml RNase-free water

PLN 2,106.00

CAT NO./ID 79254

RNase-Free DNase Set (50)

1500 Kunitz units RNase-free DNase I, RNase-free Buffer RDD, and RNase-free water for 50 RNA minipreps

PLN 747.00

CAT NO./ID 19155

QIAGEN Protease (7.5 AU)

7.5 Anson units per vial (lyophilized)

PLN 624.00

CAT NO./ID 19131

QIAGEN Proteinase K (2 ml)

2 ml (>600 mAU/ml, solution)

PLN 654.00

一般的なライゲーション反応に適した範囲で、目的のインサート/ベクターモル比にするために必要なインサート量を計算します。

インサートDNA所要量 [g] = ベクターDNA量 [g] x {インサートDNA長/ベクターDNA長} x 目的のインサート/ベクターモル比

注：モル比は{1, 2, 3, 5 ,7}から選択します。

インサート長はベクター長よりも小さい値にします。

最初に、インサートDNAとベクターDNAを制限エンドヌクレアーゼで消化し、粘着末端（または平滑末端）を持つDNA断片を生成します。次に、目的のDNA断片を切り取った後に結合し、DNAリガーゼで処理します。最後に、得られたインタクトなベクターをコンピテントなE. coli細胞に形質転換します。形質転換した細胞は適切な遺伝子選別方法によって識別します。

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