QIAcuity Cell and Gene Therapy (CGT) dPCR Assays

QIAcuity Digital PCR Systemでベクターゲノム力価定量を高精度、高再現性、および高速で実現

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dPCR CGT Assay GFP (FAM)

Cat. No. / ID:   250236

500 x 12 µl反応用(20x)。QIAcuity dPCRシステムで使用するGFP用のQIAGEN Cell and Gene Therapyアッセイです。
PLN 5,860.00
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Assay
GFP
ITR2/5
bGH polyA
WPRE
SV40 promoter
SV40 polyA
CMV promoter
hGH polyA
CMV enhancer
AMP resistance
Dye
FAM
HEX
Cy5
dPCR CGT Assay GFP (FAM)は分子生物学的アプリケーション用であり、疾病の診断、予防、あるいは治療に使用することはできません。

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特徴

  • 10種類ものウェットラボ検証済みのデジタルPCR細胞・遺伝子治療アッセイ
  • さまざまな蛍光色素を選択できるマルチプレックスアッセイで1つのサンプルからより多くの情報を取得
  • 定量PCRに匹敵する容易で迅速なワークフロー

製品詳細

アデノ随伴ウイルス(AAV)は遺伝子治療アプリケーションでウイルスベクターとして広く使用されています。しかし、臨床研究や患者治療で安全かつ確実に投与するには、ウイルスベクターの作成と精製における厳しい品質管理が求められます。AAVを利用した遺伝子治療の安全性と有効性を確保するには、正確なベクター力価定量とコンタミネーションの検出が不可欠です。

パフォーマンス

QIAcuity Cell and Gene Therapy dPCR Assaysは、複数の蛍光色素で構成される10種類ものウェットラボ検証済みのデジタルPCR細胞・遺伝子治療アッセイです。優れた精度、再現性、および4桁以上のダイナミックレンジを提供し、ウイルス力価の高速マルチプレックス測定を可能にします。QIAcuity Digital PCR SystemQIAcuity Probe PCR Kit、およびQIAcuity Nanoplatesと組み合わせることで、定量PCRに匹敵するエンドツーエンドのデジタルPCRワークフローを実現しながら、サンプル中のAAVベクターゲノムコピー数の絶対定量を可能にします。バイオ医薬品の製造および品質管理における要求事項を織り込んで設計されたアッセイです。

原理

ナノプレートでのdPCRの原理はこちらで説明しています。

QIAcuityによるAAV定量に特化した細胞・遺伝子治療アッセイです。シングルプレックス およびマルチプレックス反応で使用できることが検証済みで、 目的遺伝子アッセイ と組み合わせることもできます。本アッセイは次の特長を備えています。

  • 0.3コピー/µlの正確な定量
  • 幅広いダイナミックレンジによる高い精度
  • アッセイ間(蛍光色素の種類に関係なく)およびオペレーター間での高い正確度
  • 蛍光色素やオペレーターに左右されない高い精度(平均値からのばらつきが10%未満)
  • デジタルPCR測定および定量PCR測定に使用可能

操作手順

QIAcuity Cell and Gene Therapy dPCR Assaysは、すぐに使用できる20倍濃縮プライマープローブミックスとして提供されます。複数の蛍光色素から選択でき、QIAcuity Probe PCR Kitと使用するために最適化されています。ベクター力価の絶対定量やアッセイのロバスト性評価などシングルプレックスおよびマルチプレックスの細胞・遺伝子治療アプリケーションに対応します。

アプリケーション

QIAcuity Cell and Gene Therapy (CGT) dPCR Assaysは、ウイルスベクターの力価測定やベクターゲノム完全性の測定などさまざまなアプリケーションに使用されています。AAV生成に使用するAmpプラスミドのコンタミネーションの特定にも使用されます。このdPCR CGT Assaysを遺伝子治療開発の品質管理プロセスに導入することで、安全性と有効性の高い治療をより確実に生み出すことができます。

裏付けデータと数値

FAQ

Do I need to use restriction enzymes when quantifying AAV genomes?

In some cases, it is recommended to perform a digest with compatible restriction enzymes. For example, when quantifying ITRs, the strong secondary structure of the terminal repeats might affect titration. Compatible restriction enzymes are indicated in the corresponding data sheets of the CGT dPCR assays.

FAQ ID - 3866
How can I resuspend the lyophilized assay?

Please resuspend the lyophilized assays in 330 µl TE buffer to obtain a 20× stock. Additional information can be found in the QSP and the data sheets.

FAQ ID - 3864
Any recommendations on how can I process my AAV samples?
Are the assays also compatible with qPCR?

Yes. The assays can also be used for vector genome titration in a qPCR.

FAQ ID - 3871
Can I use the CGT dPCR assays for the titer determination of RNA viruses?

Yes, you can. cDNA would be used in this case for quantification.

FAQ ID - 3869
In which channels can you detect the CGT dPCR assays?

Most of the assays are offered with a FAM, HEX, or Cy5 fluorophore, and can be detected in the Green, Yellow, or Crimson channel, respectively. SV40 poly A, hGH poly A, and Amp resistance assays are only available with a FAM or HEX fluorophore.

FAQ ID - 3863
How do I know if the assays are compatible with the sample DNA of interest?

An extended sequence context for each assay is provided in the corresponding data sheet. 

FAQ ID - 3870
Can they be used with lentiviral vectors?

Yes. The assays can also be used with lentiviral vectors. However, lentiviral vectors have an RNA genome. cDNA synthesis is crucial before performing the PCR for titer quantification.

FAQ ID - 3872
What quenchers are used?

The probes are double quenched with ZEN/TAO and IOWA black quenchers.

FAQ ID - 3865
Can I combine your CGT dPCR assays with custom designed assays?

Yes, the CGT dPCR assays can be used in singleplex and multiplex reactions. Custom designed assays can be added into a multiplex reaction according to customer needs.

FAQ ID - 3861
Can the CGT dPCR assays also be used for the analysis of AAV genome integrity?

Yes. When multiplexing different targets, it is possible to get additional information on genome integrity using the “Multiple occupancy” analysis in the QIAcuity Software Suite.

FAQ ID - 3867
Can the CGT dPCR assays also be used for the quantification of non-AAV samples?

Yes. They can be used as long as the assays match the region of interest.

FAQ ID - 3868
How many assays can be multiplexed?

Two to five assays can be combined into a multiplex reaction depending on the QIAcuity Digital PCR platform, hence the 2-plex or 5-plex instruments.

FAQ ID - 3862