세포주 조작

개요

세포주 조작의 취약점

유전자 편집 기술의 낮은 성공률을 고려하면, 성공적으로 편집된 클론에 대한 스크리닝 및 편집물의 특성화를 완료하기까지는 수개월이 걸릴 수 있습니다.
유전자 편집, 바이러스 형질도입 또는 심지어 정규 형질감염은 종종 염색체 분석 및 FISH와 같은 기존 방법에서 놓치는 염색체 재배열과 구조적 변이체 등 표적 외 영향을 유발할 수 있습니다.

1주일 소요:

형질주입
형질도입
CRISPR 유전자 편집

수개월 소요:

클론 선택
Sanger 염기서열 분석
qPCR 밸리데이션
유전자 발현 분석

CRISPR 및 QuantiNova 키트

수 주 소요:

유전체 온전성 평가
표적 외 분석
RNA 염기서열 분석

Epitect HI-C Kit

품질 때문에 속도를 포기하지 마세요 – 대신, 클론 선택과 세포주 특성화 워크플로우에서 두 가지를 결합하세요

Cell line developement benefits illustration

클론 선택과 농축

CRISPR 스크리닝으로 인해 몇 주 동안 바쁘신가요?

CRISPR 유전자 편집 특성화를 통해 불필요한 작업을 줄여보세요. 그 방법에 대한 동영상을 시청하세요.

CRISPR 유전자 편집을 더 빠르고 쉽게 특성화하는 방법

관심 대상 클론에 대해 3배 빠른 경로를 이용하세요

10cells/µL만을 이용해 3일 안에 CRISPR 유전자 편집을 특성화하세요.

홍보 자료 확인

유전자 발현 분석 - QuantiNova PCR을 이용하여 전사 수준에서 유전자 편집 검증

세포에서 바로 qPCR을 수행하세요

관심 대상 클론을 확인하는 데 필요한 시간과 노력을 최소화하세요.

홍보 자료 보기

클론 선택 워크플로우를 가속화할 준비가 되셨나요?

QIAprep&amp CRISPR kit와 QuantiNova 1단계 RT-qPCR 솔루션을 상세하게 확인할 수 있는 전용 페이지로 이동하세요

제품으로 이동하기

세포주 특성화

5일 이내에 실제 유전체 상태를 알아내세요

이 동영상을 시청하고 조작된 세포에서 의도치 않은 유전체 변화가 있는지 확인할 수 있는 간단하면서도 우아한 접근 방법을 찾아보세요.

세포주 개발 과정 중 조기에 염색체 변형을 확인하세요

염색체 분석이나 FISH가 아니라 EpiTect Hi-C를 선택해야 하는 이유는 무엇인가요?

기존 방법과 비교하여 EpiTect Hi-C는 유전체에 대해 10배 더 선명한 결과를 제공하여 염색체 재배열과 구조적 변이체와 같은 유전체 사각지대를 확인할 수 있도록 합니다. 이 홍보 자료에서 더 자세히 알아보세요.

지금 다운로드

세포에 숨어있는 의도치 않은 변화를 미리 확인하세요

전용 페이지로 이동하여 EpiTect Hi-C에 대해 알아보세요

구매하기

자주 묻는 질문

CRISPR 스크리닝

QIAprep&amp CRISPR 샘플 준비 및 표적 증폭은 코팅 시약의 영향을 받지 않습니다. 추가 정보 및 검사한 코팅 시약 목록은 부록 C의 QIAprep&amp CRISPR 및 CRISPR-Q Custom Kit 안내서에서 확인할 수 있습니다.

QIAprep&amp CRISPR Kit에 포함된 AllTaq PCR 화학검사는 억제제에 대해 굉장히 견고합니다. 샘플 준비에 영향을 받지 않으며 PCR 반응은 최대 1µg/mL까지 견딥니다.

CRISPR-Q Custom PCR Assay는 dPCR에 사용할 수 없습니다. 이는 표준 사이클러에서의 기존 PCR 실행용이며 PCR 산물은 QIAxcel이나 겔에서 분석합니다. CRISPR-Q Custom PCR Assay에는 절단 부위 측면에 위치한 2개 프라이머가 포함되어 있습니다. 그 목적은 다음 Sanger 염기서열 분석을 위한 템플릿 준비뿐만 아니라 클론의 빠른 PCR 확인을 수행하기 위함입니다. Sanger 염기서열 분석의 경우, 해당 CRISPR-Q Sanger Primer를 사용합니다. editing 이벤트를 확인하기 위한 dPCR은 Sanger 염기서열 분석의 대안이며, 해당 이벤트에 특정됩니다.

EpiTect Hi-C

예. Hi-C 파트 1 워크플로우의 Hi-C 분해, Hi-C 말단 라벨링, Hi-C 라이게이션, 또는 염색질 탈가교 결합 단계에 따라 사용자는 샘플을 −15~−25°C에 보관할 수 있으며 나중에 절차를 재개할 수 있습니다.

샘플당 5 x 10³ 및 2.5 x 10⁶의 사람 또는 마우스 세포(또는 30ng–15µg DNA 등가량) 범위를 벗어나는 투입량을 사용하는 경우, 결과적인 차세대 염기서열 분석(Next-Generation Sequencing, NGS) 라이브러리의 품질에 영향을 미치는 위험이 있어 더 높은 수준의 내향(FR) 염기서열 판독 편향, 라이게이션되지 않은 말단, 인접한 재라이게이션된 제한 단편을 포함한 리드 쌍을 가질 가능성이 높습니다.

예. 그러나 세포는 1% 포름알데히드를 이용해 가교 결합되었어야 하며, 6개월 넘게 냉동 상태가 아니었어야 합니다.

EpiTect Hi-C 염기서열 분석 라이브러리는 모든 Illumina 염기서열 분석 플랫폼과 호환됩니다.

예. 분석을 위해 추가 정보가 필요할 것입니다. 여기에는 GATC 부위 절단을 위해 사용된 EpiTect Hi-C Kit의 엔도뉴클레아제, GATCGATC 염기서열로 구성된 Hi-C 라이게이션 후 생성된 Hi-C 접합부 모티브(또는 태그) 등이 있습니다.

Illumina 염기서열 분석기에서 36–150bp의 리드 길이를 이용하여 EpiTect Hi-C 라이브러리를 염기서열 분석할 수 있습니다. 그러나 리드 길이에 따라 매핑 가능성이 증가하므로 최상의 결과를 얻으려면 2 x 150bp의 염기서열 분석 리드를 사용할 것을 권장합니다.

예. 귀하의 데이터를 EpiTect Hi-C 데이터 분석 포털에서 분석하려면 Hi-C 분석에서 QIAGEN 온라인 GeneGlobe 데이터 분석 센터(qiagen.com)를 방문하세요.

QuantiNova RT-PCR kit

표준 연구실 장비 및 실시간 사이클러가 이 절차에 적합합니다. 적합한 분석을 선택하려면 mRNA의 SYBR Green 또는 프로브 기반 검출을 위해 GeneGlobe를 통해 QuantiNova LNA Assays 에 방문하세요.

QuantiNova 1단계 RT-qPCR 키트는 단일 세포에서도 mRNA를 검출할 수 있습니다. 그러나 적절한 양의 세포를 선택하려면 편집된 관심 유전자의 예상 존재비를 고려해야 합니다. PCR 반응 용기당 최대 2000개의 세포가 권장됩니다.

다양한 세포주가 설명된 직접 PCR 프로토콜에서 성공적으로 사용되었으며 모든 흔히 사용되는 세포주는 이 절차에 적합할 가능성이 높습니다.

예, RNA 또는 RNase 및 프로테아제 등 사멸 세포에서의 잔해물 및 세포내 물질뿐만 아니라 세포외 물질도 세포 배양액에 방출되며 RT-PCR을 방해할 수 있습니다. 세포 배양 배지로 세포를 세척하여 이를 제거할 것을 강력히 권장합니다.

아니요, QuantiNova qRT-PCR Kit는 2상 1단계 qRT-PCR을 사용하며, 이는 상온에서 역전사 효소와 Taq 중합효소 모두를 비활성 상태로 유지하여 성능을 저해하지 않으면서도 편리한 실온 설정이 가능하도록 합니다.