dPCR Copy Number Assays

• 인간 게놈의 모든 유전자에 대해 사전 설계된 분석 항목
• 유전자당 3개의 디자인 위치 선택: 5’, 중간 및 3’
• 요청 시 더 많은 사전 설계된 분석 항목 제공
• 200개를 초과하는 표적에 대한 분석 항목들이 dPCR 웨트 랩(wet-lab) 테스트를 거침
• dPCR 사용을 위한 간단하고 직관적인 형식
• QIAcuity Software Suite를 사용한 편리한 복제 수 데이터 분석

dPCR Copy Number Assays는 개별 유전자 또는 관심 영역에 대해 구체적이고 정확하며 재현성 있고 해석하기 쉬운 복제 수 변경 분석을 가능하게 합니다. 200개 이상의 표적에 대한 분석 항목들은 dPCR 웨트 랩(wet-lab) 테스트를 거쳤습니다. 다른 모든 인실리코(in silico) 설계는 벤치 검증을 거쳤으며 NGS 후속 연구, 특정 표적 스크리닝 및 기타 관련 연구에 바로 사용할 수 있습니다.

dPCR Copy Number Assays는 바로 사용 가능한 25x 농축된 분석 항목이 튜브 형식으로 제공됩니다. 튜브에는 QIAcuity EG PCR Kit 및 QIAcuity 기기와 함께 사용할 프라이머 쌍이 들어 있습니다. dPCR 웨트 랩(wet-lab) 테스트를 거친 분석 항목들은 특정 분석 항목 제품 화면에서 플래그가 표시됩니다.

분석 품질에 대한 실험실 검증으로 dPCR Copy Number PCR Assays가 신뢰성 있는 결과를 제공함을 보장합니다. 디지털 PCR에 의한 복제 수 분석은 이전에 세포유전학적 방법으로 식별된 염색체 이상을 포함하는 세포주에서 이수 배수체를 정확하게 식별할 수 있습니다. 디지털 PCR은 적게는 1.2배 또는 5개에서 6개로의 복제 수 변화를 검출할 수 있습니다. 이러한 작은 변화의 차이를 확인할 수 있을 정도의 식별 수준을 가능하게 하는 핵심 요소는 dPCR 반응의 분획입니다.

정규화(normalization)를 위해 인간 게놈당 다른 복제 수에 해당하는 Reference Assays 또한 제공됩니다.

모든 dPCR Copy Number PCR Assays는 인간 게놈의 고유한 영역에 대해 설계되었습니다. dPCR Copy Number Reference Assays(별도 제공)에는 유전체에 서로 다른 복제 수가 있는 다양한 reference들을 포함하고 있어 각 분석마다 최적의 정규화(normalization) reference를 선택할 수 있습니다. 유전자 또는 관심 표적의 정확한 복제 수를 계산할 수 있도록 두 개의 기준 분석 항목을 포함할 것을 권장합니다.

dPCR Copy Number Assays는 바로 사용할 수 있습니다. DNA 샘플과QIAcuity EG PCR Kit의 마스터 믹스를 QIAcuity Nanoplate 의 개별 분석 항목 혹은 기준 분석 항목에 추가하기만 하면 됩니다. 검출은 삽입 염료인 EvaGreen을 기반으로 합니다.

나노플레이트에서의 dPCR 반응 원리는 여기에 설명되어 있습니다.

dPCR 실험을 설정하려면 추출한 genomic DNA 샘플(신선한, 냉동 또는 고정 샘플로부터 분리)의 일부를 QIAcuity EG PCR Kit 마스터 믹스 및 dPCR Copy Number Assay에 추가합니다. 각 유전자 또는 관심 및 각 기준 분석 항목은 자체 개별 웰에서 분석됩니다.

나노플레이트를 로딩하고 밀봉한 후 QIAcuity 기기에서 권장하는 사이클링 프로그램으로 플레이트를 실행합니다. 마이크로리터당 복제 수의 결과 값은 QIAcuity Software Suite의 절대 정량 분석 유형에 표시됩니다. 유전체당 복제 수를 계산하려면 QIAcuity Software Suite에서 복제 수 데이터 분석 항목 유형을 선택하고 관심 유전자/영역 또는 정규화 기준(normalization reference)에 해당하는 나노플레이트 웰을 정의합니다.

dPCR Copy Number Assays는 신선한, 냉동 또는 고정 샘플의 DNA를 사용하여 개별 유전자좌에서 복제 수 변형 또는 변이를 정확하게 검출하는 데 매우 적합합니다.