dPCR LNA Mutation Assays

• 듀플렉스 분석 항목 디자인으로 돌연변이 및 야생형(wild type) 서열을 검출합니다
• FAM + HEX 또는 Atto 550 + ROX 형광 염료 조합 선택
• LNA 강화 프라이머 및 프로브로 분석 항목 특이성과 민감도가 증가합니다
• 웨트 랩(wet-lab) 테스트를 거친 200개 이상의 표적들에 대한 dPCR 분석 항목
• 순환 종양 DNA, 액상 생검, FFPE 및 기타 조직 검체와 함께 사용하기에 적합
• QIAcuity Probe PCR Kit와 함께 사용

dPCR LNA Mutation Assays를 사용하면 COSMIC와 같이 종합적으로 선별된 데이터베이스에서 선택된 개별 서열 돌연변이를 검출할 수 있습니다. 분석 항목 디자인들은 dPCR 웨트 랩(wet-lab) 테스트를 거쳤으며 결과 데이터가 제공됩니다. QIAcuity Nanoplate의 한 웰의 야생형(WT) 배경에서 표적 돌연변이 검출에 대한 민감도는 0.1%입니다. 반응을 여러 웰로 나누고 분석을 결합하면 더 높은 민감도를 얻을 수 있습니다. 두 개의 서로 다른 형광 염료 조합을 선택하면 돌연변이체 및 야생형(WT) 서열을 검출할 수 있고 하나의 웰에서 두 개의 표적 돌연변이를 멀티플렉싱으로 분석할 수 있습니다.

Assay들은 바로 사용 가능한 30x 농축된 분석 항목이 튜브 형식으로 제공되며, 돌연변이 및 야생형(WT)에 대한 2개의 프라이머와 프로브로 구성됩니다. dPCR LNA Mutation Assays는 QIAcuity Probe PCR Kit와 함께 사용해야 합니다.

dPCR을 사용하면 희귀 이벤트/서열 변이체의 검출 및 절대 정량화에서 민감도를 높일 수 있으므로 야생형(WT) genomic DNA의 배경에서 0.1%의 돌연변이 존재를 검출할 수 있습니다. 분획으로 표적의 특정 농도 증가가 가능합니다. 종말점 증폭 및 노이즈와 구분되는 신호를 통한 표적에 대해 양성/음성 이진법적인 판독으로 정밀한 정량이 가능하며, 이는 증폭 성능(예: PCR 억제제에 의한 원인)과는 무관합니다.

dPCR LNA Mutation Assays는 특정 돌연변이 서열의 존재를 식별하는 듀플렉스, 가수분해 프로브 기반 분석입니다. 하나의 프로브는 돌연변이 대립유전자를 검출하고 다른 프로브는 야생형(WT) 대립유전자를 검출합니다. 디지털 PCR은 야생형(WT) 배경에서 돌연변이 DNA 서열을 검출하는 가장 민감하고 신뢰할 수 있는 방법을 제공합니다. dPCR LNA Mutation Assays는 LNA로 강화된 프라이머와 프로브를 사용하여 분석 특이성과 민감도를 높여 하나의 나노플레이트 웰에서 야생형(WT) genomic DNA의 배경에 0.1%로 존재하는 돌연변이를 검출할 수 있습니다.

2개의 형광 검출 옵션으로 하나의 웰에서 2개의 돌연변이 표적을 멀티플렉스 분석할 수 있습니다. 제품 구성 시 돌연변이 + 야생형(wild-type) 검출을 위한 FAM + HEX 또는 Atto 550 + ROX 선택 가능.

dPCR 실험을 설정하려면 추출한 genomic DNA 샘플(신선한, 냉동 또는 고정 샘플로부터 분리)의 일부를 QIAcuity Probe PCR Kit 마스터 믹스 및 dPCR LNA Mutation PCR Assay에 추가합니다. 각 반응은 QIAcuity Nanoplate의 하나 또는 여러 웰에서 분석됩니다.

나노플레이트를 로딩하고 밀봉한 후 QIAcuity 기기에서 권장 사이클링 프로그램을 선택합니다. QIAcuity Software Suite의 절대 정량 분석 항목 유형에서 마이크로리터당 복제 수 결과가 표시됩니다. 돌연변이 표적의 계산된 분별 존재비(fractional abundance) 및 해당 데이터 수치가 분석 유형 돌연변이 분석에서 제공됩니다.

dPCR LNA Mutation PCR Assays는 신선한, 냉동 또는 고정 샘플의 DNA에 존재하는 개별 특정 서열 돌연변이를 빠르고 정확하게 식별하는 데 매우 적합합니다.