PCR 领域中的全新绝对定量技术 – 数字 PCR

简而言之，数字 PCR 可用于检测稀有序列、拷贝数变异和微生物靶标；定量罕见突变，包括液体活检样本；进行单细胞分析；测量病毒载量；分析基因表达；定量NGS文库以及其他多种应用。

PCR 和数字 PCR 之间的区别在于，终点或传统 PCR 只能提供定性或半定量分析，而 dPCR 可以提供绝对定量。数字 PCR 更快速、更精确且重复性更好，它提供了多重检测功能，但也需要更大的初始投资。

数字 PCR 的优势包括无需使用标准品或标准曲线即可进行靶标绝对定量、对 PCR 抑制剂的耐受性更高、具备检测微小倍数差异所需的高精确度及高灵敏度、低检测限和高重复性，尤其是在不同实验室之间。

数字 PCR 的缺点包括动态范围略窄于 qPCR。该方法不太适用于较长的扩增子。

QIAcuity 仪器软件不允许读取及处理未密封的纳米微孔板。如果您想要试运行程序，请使用密封的纳米微孔板，并在 QIAcuity Software Suite 中设置该孔板。

数字 PCR 的准确性因 dPCR 系统和应用而异。对 dPCR 与 qPCR 的精确性和灵敏性进行对比，数据表明，dPCR 能够将重复测试的标准差降低至三倍。在突变检测的灵敏性方面，qPCR在10%突变率时失去可靠的定量能力，而dPCR能检测至0.1%的突变率。

之所以被称为数字 PCR，是因为它可以让您获得二进制式的“开/关”或“是/否”的结果。数字分析只能区分两种信号，而不是一系列的可能性。所以事物非黑即白，而不是 50 度的灰色。特别是对于数字 PCR，传感器区分阳性和阴性反应分区，并就反应分区中是否存在靶标给出是或否的答案。

我们的 QIAcuity 数字 PCR 系统是基于纳米微孔板技术而开发的，与微滴式数字 PCR（ddPCR）相比具有显著优势。集成的 dPCR 纳米微孔板中固定反应分区可防止 ddPCR 方式中出现的微滴大小和聚合差异性。此外，同时读取纳米微孔板中样本的所有反应分区可以获得更快的读板速度。纳米微孔板不仅像qPCR一样用户友好，易于移液，而且还适应前端自动化。最重要的是，正确密封的纳米微孔板可有效防止发生样本蒸发及孔间交叉污染。微分化、热循环和成像集成到一个全自动仪器中，可在两小时内交付结果，而其他一些数字PCR系统则需要超过4小时。此外，可扩展的配置和更高的多重检测能力使 QIAcuity 数字 PCR系统适用于各种实验室和应用要求。使用 QIAcuity Software Suite，可定义数字 PCR 实验、样本和反应混合物，将其分配至纳米微孔板并转移到 QIAcuity 仪器。运行完成后，您可分析数据，生成报告，并可导出数据以供进行远程分析。

QIAcuity 仪器软件不允许读取及处理未密封的纳米微孔板。如果您想要执行试运行程序，请使用密封的纳米微孔板，并在 QIAcuity Software Suite 中设置该孔板。

我们的 QIAcuity 数字 PCR 系统是基于纳米微孔板技术而开发的，与微滴式数字 PCR（droplet digital PCR，ddPCR）相比具有显著优势。集成的 dPCR 纳米微孔板中固定反应分区可防止 ddPCR 方式中出现的大小和聚合差异性。此外，同时读取纳米微孔板中样本的所有反应分区可以获得更快的读板速度。纳米微孔板不仅像qPCR一样用户友好，易于移液，而且还适应前端自动化。最重要的是，正确密封的纳米微孔板可有效防止发生样本蒸发及孔间交叉污染。微分化、热循环和成像集成到一个全自动仪器中，可在两小时内交付结果，而其他一些数字PCR系统则需要超过4小时。此外，可扩展的配置和更高的多重检测能力使 QIAcuity 数字 PCR系统适用于各种实验室和应用要求。使用 QIAcuity Software Suite，可定义数字 PCR 实验、样本和反应混合物，将其分配至纳米微孔板并转移到 QIAcuity 仪器。运行完成后，您可分析数据，生成报告，并可导出数据以供进行远程分析。

如果使用的是 QIAcuity Eight dPCR 系统，在 24 孔纳米微孔板中，您可以最多分析 312 个样本；在 96 孔纳米微孔板中，您可以最多分析 1248 个样本。更多信息，请点击这里。