RNA 的一切:扩增、测序、连接和标记
通过扩增检测和操纵 RNA
逆转录酶是能够聚合与原始 RNA 模板互补的 DNA 链 (cDNA) 的酶。RNA 易被 RNase 降解,使用逆转录酶生产 cDNA 能够克服使用 mRNA 时面临的问题。cDNA 成为 RNA 研究(例如基因表达分析)的各种下游应用中的稳定模板。可以使用常规 PCR、qPCR、一步式 RT-qPCR 或等温方法进行 cDNA 模板的扩增。扩增后,可以使用常规酶方案进行克隆,或利用 T4 DNA 聚合酶的 3’→5’ 核酸外切酶活性进行不依赖于连接反应的克隆。
所有逆转录酶(RNA 依赖性 DNA 聚合酶)均可用于:
RNase H (+/-) |
专业应用 | ||
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P7600L EnzScript |
即将推出 | - | 用于长 cDNA 和具有高百分比全长 cDNA 的文库; 需要模板切换的应用,即 RNA Seq |
P7720L StableScript |
即将推出 |
- |
用于长 cDNA;提高了持续合成能力、抑制剂抗性和热稳定性 |
205111 Omniscript Kit |
+ | 微阵列标记;特别设计用于使用任何数量的 RNA 进行逆转录;优化的缓冲液;无需 RNase H 步骤 |
RNA 聚合酶和连接酶
RNA 聚合酶,或更具体地说是 DNA 导向的 RNA 聚合酶,是利用 DNA 模板合成 RNA 的酶。Poly(A) 聚合酶使用单链 RNA 作为引物,通过催化腺嘌呤残基掺入 RNA 的 3’ 末端,将 poly(A) 尾部添加到 RNA 中。
T4 RNA 连接酶在 RNA 分析中特别有用,尤其是高通量 RNA 测序和微阵列分析等上游程序。T4 RNA 连接酶 1 和 2 能够通过连接相邻的 3'-OH 和 5'-PO4 多核苷酸来标记、环化或执行 RNA 分子间连接。使用 T4 RNA 连接酶 1 将接头连接至 RNA 3’ 端是通过 RT-PCR 和高通量测序进行 RNA 定量和发现的第一步。
作用 | 应用 | ||
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P7180L T7 RNA Polymerase |
即将推出 | 以 5’→ 3’ 方向从 DNA 模板合成 RNA; 对 T7 启动子具有特异性 |
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P7460L Poly(A) Polymerase |
即将推出 |
催化 AMP 从 ATP 添加到 RNA 的 3’-OH, |
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L6050L T4 RNA Ligase 1 |
即将推出 | 单链 RNA 连接酶;也连接单链 DNA 分子 |
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L6080L T4 RNA Ligase 2 |
即将推出 | 连接 dsRNA 中的缺口;将 RNA 的 3’-OH 连接到 双链杂合体中的 DNA 的 5’-PO4 |
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L6070L |
即将推出 | 催化预腺苷酸化 5’ 磷酸(DNA 或 RNA) 与 RNA 的 3’ 羟基之间的 磷酸二酯酶键形成 |
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消化 RNA 和保护 RNA
核糖核酸酶保护实验 (RPA) 是一种使用 RNase A 测定相对或绝对转录物丰度以及绘制 mRNA 末端和内含子/外显子边界的技术。
单碱基置换可以通过一种涉及对 RNA:DNA 异源双链中的单碱基错配进行 RNase A 剪切的简单酶方法进行检测和定位。
作用 | 应用 | ||
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19101 RNase A |
在 C 和 U 残基处降解 ssRNA 的核糖核酸内切酶* |
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Y9220L RNase H |
即将推出 | 用于水解与 DNA 杂交的 RNA 的磷酸二酯键的 核糖核酸内切酶 |
RNase H 活性可降解 DNA:RNA 复合体的 RNA 模板,从而释放单链 cDNA 作为合成第二链 cDNA 的模板 |
Y9240L RNase Inhibitor |
即将推出 | RNase A、B、C 的猪源性非竞争性抑制剂; 不抑制 RNase H 活性。 |
保护 RNA 不被降解;通常用作 RNA 酶法 操纵的预防措施 |
RNA 分析常见问答
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