QuantiNova Reverse Transcription Kit

用于快速的cDNA合成和高度可重复性的两步法RT-PCR

S_1084_5_GEN_V2
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QuantiNova IC SYBR Green Assay

Cat. No. / ID:  QT02589307

QuantiTect Primer Assay for SYBR-based detection of QuantiNova Internal Control RNA; available via GeneGlobe (sufficient for approx. 500 x 20 µl rxn). For use with QuantiNova SYBR Green PCR Kit or QuantiNova SYBR Green RT-PCR Kit
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Detection type
SYBR Green
Probe
QuantiNova Reverse Transcription Kit 旨在用于分子生物学应用。该产品不能用于疾病诊断、预防和治疗。
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Features

  • gDNA Removal Mix可消除gDNA带来的误差
  • 内质控可指示cDNA合成的质量
  • 高亲和性逆转录酶可实现宽线性范围的cDNA合成

Product Details

独特的QuantiNova Reverse Transcription Kit提供了含有基因组DNA去除方案和内质控的一种快速便捷的cDNA合成方法。gDNA Removal Mix可有效去除RNA样本中的基因组DNA污染,同时内质控RNA可以监测逆转录和扩增反应是否成功。QuantiNova Reverse Transcription Kit提供了快速高效逆转录反应所需的一切。合成的cDNA适用于进行real-time PCR, 可以对任何mRNA区域的靶向序列进行可靠定量。

Performance

独特的gDNA Removal Mix可迅速有效去除RNA样本中的基因组DNA污染。去除基因组DNA污染对于获得精确基因表达结果非常关键,并且在不能设计出RNA特异性的引物时,例如当分析单外显子基因时,也需要去除基因组DNA污染。使用gDNA Removal Buffer可以节省时间和成本,因为不需要在反应中或反应后单独进行DNase消化。

全新开发的内质控是一种成分明确的转录本(RNA分子),可直接加入您的样本并同时被逆转录为cDNA,可直接反应仪器或相应试剂是否正常,实验构建的体系是否存在错误,以及反应体系中是否存在抑制剂。预期的Cq (CT)范围可以用来确认逆转录和PCR扩增的成功与否,以及实验结果的可重复性。

QuantiNova Reverse Transcriptase的高RNA亲和性确保您可从任何RNA模板获得高产率cDNA。即便是难扩增模板,如高GC含量或含有复杂二级结构的模板,也可被成功进行逆转录反应。Reverse Transcription Mix包含一种特别优化的oligo-dT和随机引物混合物,可以从包括5’区域在内的RNA转录本的任何位置进行cDNA合成。无论扩增靶标位于转录本的哪个位置,该试剂盒均能提供可供real-time PCR分析使用的高产量cDNA。同时对于低表达丰度的基因, 该试剂盒还可提供更高灵敏度的检测能力。

QuantiNova Reverse Transcription Kit可在较宽的起始量范围内提供精确的结果,在标准的实验方案中起始RNA量可最高达5 µg,在特殊要求的实验条件下该用量可以加倍。

Principle

QuantiNova Reverse Transcriptase具有高RNA亲和性,可以在极宽的模板量范围内(10 pg– 5 μg)合成cDNA(见图: 5 µg–10 pg起始 RNA的精确定量)。无论扩增靶标位于转录本的哪个位置,该试剂盒可提供用于real-time PCR分析的高产量cDNA。即使难扩增模板,比如高GC含量或含有复杂二级结构的模板,也可被成功进行逆转录反应。QuantiNova RT Buffer经过优化,可兼容real-time PCR缓冲液。

为获得精确的real-time RT-PCR基因表达检测结果,非常重要的一点是保证只有cDNA被扩增和检测到。gDNA Removal Mix可迅速有效的去除基因组DNA干扰(见图: 有效去除gDNA污染保证准确定量转录本)。使用gDNA Removal Mix节省了时间和成本,因为不需要在反应中或反应后单独进行DNase消化。同时,也无需设计RNA特异性引物或探针。

检测cDNA合成的差异度可以显示实验结果的可重复性。全新开发的内质控是一种成分明确的转录本(RNA分子),可直接加入您的样本并同时被逆转录为cDNA,可直接反应仪器或相应试剂是否正常,实验构建的体系是否存在错误,以及反应体系中是否存在抑制剂。因为内质控和真实转录本的性质相似,所以它可以在接下来的qPCR实验中用来确认逆转录和PCR扩增的成功与否(见图: 内质控可靠检测是否存在抑制剂)。
 
QuantiNova Reverse Transcription Kit成分
成分 优势
gDNA Removal Mix 确保在real-time RT-PCR中只检测RNA
Internal Control RNA 确认RT-PCR成功与否
QuantiNova Reverse Transcriptase RNA模板量范围极宽(10 pg – 5 μg RNA)
高灵敏度
QuantiNova RT buffer system 逆转录难扩增模板
RT Primer Mix 从转录本任意区域合成cDNA,包括从5’区

See figures

Procedure

使用QuantiNova Reverse Transcription Kit进行基因组DNA去除和cDNA合成仅需20分钟。该试剂盒包含进行快速cDNA合成的所需的一切成分。

纯化后的RNA和gDNA Removal Mix简单孵育即可除去基因组DNA污染。和其它方法不同的是,RNA样本接下来可直接与Reverse Transcription Mix和Reverse Transcription Enzyme的预混液混合,进行逆转录反应。使用QuantiNova Reverse Transcriptase,逆转录反应可以在低温下进行,包括对于复杂的二级结构模板。反应在42°C的温度条件下进行保证了RNA的完整性,并随后在85°C进行酶灭活以终止反应。不需要进行额外的RNA变性或RNase H降解。

Applications

QuantiNova Reverse Transcription Kit可从任何起始材料(包括激光微切割样本或组织活检样本)获得高效及高灵敏度real-time RT-PCR结果。

Supporting data and figures

Resources

产品选择指南 (1)
试剂盒操作手册 (1)
QuantiNova LNA Probe PCR Handbook
安全数据表 (1)
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
Certificates of Analysis (1)
Safety Data Sheets (2)
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
Kit Handbooks (1)
QuantiNova LNA Probe PCR Handbook
Selection Guides (1)