Ni-NTA Superflow Cartridges

用于使用液相色谱系统纯化 His 标签蛋白

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Ni-NTA Superflow Cartridges (5 x 5 ml)

Cat. No. / ID: 30761

5 个预装 5 ml Ni-NTA Superflow 的试剂盒：用于使用液相色谱系统自动纯化 His 标签蛋白

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Features

在最多样化的条件下进行最稳健的一步纯化
高达 50 mg/ml 的高产量高纯度蛋白
在任何 LC 系统上都能快速、简便、可重复地进行处理

Product Details

Ni-NTA Superflow 是用于纯化 His 标记蛋白的最常用树脂，有预装 1 ml 和 5 ml 试剂盒可供选择，用于在 FPLC、ÄkTA 和 BioLogic 等液相色谱系统上进行自动纯化，或使用注射器手动纯化。

Performance

Ni-NTA 在提供高产量的高纯度蛋白方面的性能优于其他树脂（见图 Ni-NTA 在提供高产量的高纯度蛋白方面优于其他树脂）。与其他市售镍树脂进行的独立比较表明，Ni-NTA Superflow 的镍浸出水平最低（见图一项独立研究表明，Ni-NTA 比其他任何测试过的树脂损失的镍都要少）。其意义在于，如果镍从树脂中浸出，剩余的带电配体就会充当离子交换剂，与无标记蛋白结合，从而污染洗脱馏分。Ni-NTA 具有较高的稳定性，这意味着即使在 10 mM DTT 存在的情况下，也可使用其获得完全活性的高纯度蛋白（见图与 IDA相比，Ni-NTA 中的额外配位点与镍结合得更紧密）。

如表中所示，在所有纯化规模中，纯度始终保持在较高水平。Ni-NTA Superflow Cartridges 是 QIAGEN 提供的 His 标记蛋白综合互补解决方案的一部分（见图对纳克到克级的 His 标记蛋白进行可扩展纯化）。

生物制药项目 IL-1β 的微型到大型纯化
基质	基质体积	培养物体积	产量	回收率 (%)	纯度*
Ni-NTA Magnetic Agarose Beads（微型）	100 μl	1 ml	33 μg	~90%	~97%
Ni-NTA Superflow（小型）	500 μl	320 ml	6 mg	~80%	~96%
Ni-NTA Superflow（中型）	10 ml	1.7 l	109 mg	~80%	~98%
Ni-NTA Superflow（大型）	100 ml	18 l	2 g	>88%	~97%

* 使用 Agilent Bioanalyzer (Protein 50 LabChip Kit) 测定

See figures

Ni-NTA 在提供高产量的高纯度蛋白方面优于其他树脂。

一项独立研究表明，Ni-NTA 比其他任何测试过的树脂损失的镍都要少。

与 IDA（许多竞品树脂中使用的配体）相比，Ni-NTA 中的额外配位点（箭头所指）与镍结合得更紧密。

对纳克到克级的 His 标签蛋白进行可扩展纯化。

Principle

Ni-NTA 基质是纯化 His 标记蛋白的首选亲和层析溶液（见图一步法高效纯化 His 标记蛋白）。它们非常稳定，这意味着它们能与多种缓冲液成分兼容，包括强变性剂、洗涤剂甚至还原剂（见表“与 His/Ni-NTA 相互作用兼容的试剂”）。这种灵活性使研究人员能够开发出最佳的纯化方案，同时还能受益于 Ni-NTA 带来的出色分离特性，这种特性通常使第二个层析步骤成为多余步骤。

与 His/Ni-NTA 相互作用兼容的试剂。
变性剂	洗涤剂	还原剂	其他	盐	长期存放
6 M Gu·HCl	2% Triton X-100	20 mM β-ME	50% 甘油	4 M MgCl₂	高达 30% 的乙醇
8 M 尿素	2% 吐温 20	10 mM DTT	20% 乙醇	5 mM CaCl₂	或 100 mM NaOH
	1% CHAPS	20 mM TCEP 20 mM	20 mM TCEP	20 mM 咪唑	2 M NaCl

See figures

使用含有多种添加剂的缓冲液对 His 标签蛋白进行一步法高效纯化。

Procedure

耐用的 Superflow 基质允许的流速高达 10 ml/min（1 ml 试剂盒）和 40 ml/min（5 ml 试剂盒），从而能够加快纯化过程并提高产量。试剂盒可快速、方便地连接到液相色谱系统，或连接到注射器进行手动纯化。纯化过程可重现性高，可确保每次都能制备出同样优质的蛋白（见图）。

See figures

可重现性和可靠性高的纯化。

Applications

Ni-NTA 基质可用于扩大用于结构研究（例如使用蛋白质晶体学或 NMR 的研究）的 His 标记蛋白的纯化规模，或用于克级产量的生物制药生产。

Supporting data and figures

一项独立研究表明，Ni-NTA 比其他任何测试过的树脂损失的镍都要少。

一项独立研究表明，Ni-NTA 比其他任何测试过的树脂损失的镍都要少。将含有各种添加剂的 50 个柱体积缓冲液通过含有 100 μl QIAGEN、供应商 G、S 或 I 树脂的小柱。汇集流经液体后，将样品送至德国波鸿 Dr.Weßling Laboratories，根据 DIN EN ISO 17025 通过电感耦合等离子体质谱法 (ICP-MS) 进行了分析。非变性缓冲液：50 mM 磷酸钠；300 mM 氯化钠；10 mM 咪唑，pH 8.0。变性缓冲液：100 mM 磷酸钠；10 mM 三羟基甲基氨基甲烷氯化物；8 M 尿素。

Resources

For manual or FPLC purification of His-tagged proteins

Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.

For manual or FPLC purification of His-tagged proteins

Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.

Publications

A highly specific system for efficient enzymatic removal of tags from recombinant proteins.

Schäfer F; Schäfer A; Steinert K;

J Biomol Tech; 2002; 13 (3):158-71 2002 Sep PMID:19498979

Use of dual affinity tags for expression and purification of functional peripheral cannabinoid receptor.

Yeliseev A; Zoubak L; Gawrisch K;

Protein Expr Purif; 2006; 53 (1):153-63 2006 Dec 12 PMID:17223358

FAQ

Yes, Ni-NTA and Strep-Tactin Superflow Cartridges can be connected in series.

The Union M6 female/1/16’’ male connector from GE (Code No. 18-3858-01) can be used for this, for example.

FAQ ID -1606

A maximum of 1 hour is needed for the complete purification process with Ni-NTA Superflow Cartridges when recommended flow rates are applied. This is true for 1 ml and 5 ml cartridges.

Details for a typical 1 ml column run:

Equilibration (5 column volumes (cv)): 5 min
Load (10 ml Cleared Lysate): 10 min
Wash (10 cv): 10 min
Elution (10 cv): 10 min
optional: Cleaning-in-place (0.5 M NaOH, 0.5 ml/min, 7.5 cv): 15 min

FAQ ID -1605

The binding capacity of Ni-NTA resins is protein dependent. We guarantee a binding capacity of up to 20 mg/ml of Ni-NTA Superflow for every 6xHis-tagged protein (up to 20 mg per 1 ml Ni-NTA Superflow Cartridge).

However, we have examples where the binding capacity is higher (e.g.: 6xHis-CAT: 30 mg/ml resin; 6xHis-GFP: 55 mg/ml resin).

Binding capacity for the 1 ml Ni-NTA Superflow Cartridge: 20 mg
Binding capacity for the 5 ml Ni-NTA Superflow Cartridge: 100 mg

FAQ ID -1603

If the same protein is purified, the Ni-NTA and Strep-Tactin Superflow Cartridges can be used more than once. Cleaning in place (CIP) is recommended between purifications (0.5 M NaOH, 0.5 ml/min, 7.5 cv for 15 min).

However, for sequential purification of different proteins we recommend to use different cartridges. Please note that cartridges cannot be opened!

FAQ ID -1607