dPCR 与 qPCR

在对 dPCR 和 qPCR 这两种技术进行比较时，关键差异在于精确度。国家计量实验室首席科学家 Jim Huggett 表示，虽然两者都可进行高度灵敏且可靠的核酸检测和定量，这两种技术间的主要区别可以用模拟和数字收音机来类比。“对于模拟收音机，首先必须先对调节器进行精确的调节，才能以最低的干扰接收想要的频道。尽管如此，信号的质量还是取决于接收情况，而且会受到静电的干扰。这就像 qPCR 一样。它是可靠的，但需要进行优化，才能获得良好的结果，即便如此，还是会有背景噪音。对于数字收音机，你只需拨到相应的频道，频道上或者有清晰的信号，或者没有信号。后者类似于dPCR，提供精确的二进制结果。它直接计数 DNA 分子的存在或不存在。清晰的结果与低出错率的结合造就了极高的精确度。数字 PCR 非常适合检测及定量较小的差异。”

相对于 qPCR，应在何时使用  dPCR ?

当涉及到核酸定量的分子生物学和基因组学研究时，科学家们经常发现自己站在十字路口。为了更有效地实现研究目标，应该选择哪种量化技术，是更精确、更稳健的数字PCR (dPCR)还是更规范、更熟悉的定量 real-time PCR (qPCR) ? 这两种技术有相似之处，但它们的优点和局限性也依赖于所选择的应用程序。

该应用网格中给出了每种技术对某些常见应用的适用水平。

微滴式数字 PCR (ddPCR) 是数字 PCR 最早的形式之一，在上述大多数应用中已经展现出优于 qPCR 的优势。在 ddPCR 与 qPCR 的对比中，qPCR 适用于需要宽动态范围的应用，而 ddPCR 适用于需要更高精确度或丰度分析的应用。

从 ddPCR 到纳米微孔板 dPCR 的发展，拓宽了这项技术的应用范围。得益于同时读取所有样本反应分区、前端自动化以及类似于 qPCR 的简单微孔板设置，纳米微孔板 dPCR 的工作流程显著加快。这种加快的速度使其适用于筛选和高通量应用，而不会影响其精确度、准确度和灵敏度。