therascreen BRAF Pyro Kit

• 符合欧洲体外诊断98/79/EC指令
• 实时获得多个结果
• 准确定量癌症相关BRAF基因中的突变
• 简单说明复杂的序列信息

线性

将载有在BRAF基因编码子600上V600E (GTG->GAG)突变的质粒和野生型基因的质粒混合测量其线性（参见"Linearity of V600E mutation"）。这些质粒以四种不同的突变比例（5、10、30、50%）混合。每种质粒混合物用三种不同量的therascreen BRAF Pyro Kit使用焦磷酸测序技术进行分析，重复分析三次。

检测5–50%突变范围时，含有5%的容许非线性度的结果是线性的。

精密度

精密度用于检测这些试验的总的差异，对如上所述的质粒混合物进行三个不同水平的分析，每个混合物重复测量三次以获得精密度数据。

重复性（批内和批间差）基于线性测定数据计算得出（用不同的therascreen BRAF Pyro Kit在同一天测定三次）。中间精密度（实验室内部差异）由同一实验室三次检测得出，这三次检测分别由不同的操作者用不同的PyroMark Q24实时定量焦磷酸序列分析仪、以及不同的therascreen BRAF Pyro Kit在不同的三天进行。重现性（实验室之间的差异）由使用不同的therascreen BRAF Pyro Kit在两个不同的实验室分别进行检测得出。

精密度由测得的突变频率的标准偏差（%）表示。在5–50%的突变测量范围内，编码子600上V600E (GTG->GAG)突变检测的重复性、中间精密度和重现性分别为0.6–2.1%、0.7–1.8%、0.8–2.1%。

therascreen BRAF Pyro Kit用于实时定量检测人BRAF基因编码子600和464–469的突变，在PyroMark Q24实时定量焦磷酸序列分析仪上采用焦磷酸测序技术进行检测。BRAF编码v-raf鼠类肉瘤病毒癌基因homolog B1激酶，一种EGFR下游的原癌基因。研究发现，在所有癌症患者中有6-8%表现出BRAP基因的突变，在黑素瘤（50-60%）、结肠癌（10%）、甲状腺癌（39%）中BRAP基因突变则更为频繁。将近90%是V600E突变。

可检测以下种类的突变：

• 编码子600：V600A、V600E、V600G和V600M
• 编码子464–469：G464E、G464V、G466E、G466V、G469A、G469E和G469V

使用针对编码子600和编码子464-469的引物对两个片段PCR扩增后，将扩增子固定在高性能链霉素亲和琼脂糖上。将单链DNA和相应序列的引物退火处理得到DNA。然后在PyroMark Q24实时定量焦磷酸序列分析仪上设置程序和运行程序对样品进行分析（参见"Pyrogram trace of a normal genotype in codon 600"，"Pyrogram trace of a normal genotype in codons 464–469"和"Pyrogram trace of a GTG to GAG mutation in base 2 of codon 600"）。运行后可以通过调节"Sequence to Analyze"来检测稀有的突变。

therascreen BRAF Pyro Kit用于辅助鉴定黑素瘤和直肠癌，有助于通过选择性抑制BRAF突变来治疗癌症。该试剂盒用于检测人BRAF基因中编码子600和464-469的突变。

可检测以下种类的突变：

• 编码子600：V600A、V600E、V600G和V600M
• 编码子464–469：G464E、G464V、G466E、G466V、G469A、G469E和G469V