therascreen EGFR Pyro Kit

• 符合欧盟体外诊断98/79/EC指令
• 实时获得多个结果
• 准确定量EGFR基因中的突变
• 简单说明复杂的序列信息

线性

将载有野生型基因的质粒或编码子719 GGC->AGC、编码子790 ACG->ATG和编码子858 CTG->CGG及外显子19缺失2235del15和2236del15的突变质粒混合测量其线性（参见" Linearity of deletion 2235del15"）。这些质粒以四种不同的突变质粒比例（5、10、30、50%）混合。每种质粒混合物用三种不同量的therascreen EGFR Pyro Kit使用焦磷酸测序技术进行分析，重复分析三次。

检测5–50%突变范围时，含有5%的容许非线性度的结果是线性的。检测编码子719 GGC->AGC、编码子790 ACG->ATG和编码子858 CTG->CGG及外显子19缺失2235del15和2236del15的突变获得同样的结果。

精密度

精密度用于检测这些试验的总的差异，对如上所述的质粒混合物进行三个不同水平的分析，每个混合物重复测量三次以获得精密度数据。

重复性（批内和批间差）基于线性测定数据计算得出（用不同的therascreen EGFR Pyro Kit在同一天测定三次）。中间精密度（实验室内部差异）由同一实验室三次检测得出，这三次检测分别由不同的操作者用不同的PyroMark Q24实时定量焦磷酸序列分析仪以及不同的therascreen EGFR Pyro Kit在不同的三天进行。重现性（实验室之间的差异）由使用不同的therascreen EGFR Pyro Kit在两个不同的实验室分别进行检测得出。

精密度由检测的突变率标准偏差以%表示。在5~50%的突变测量范围内，外显子19缺失2235del15的突变检测的重复性、中间精密度和重现性分别为0.8–1.2、0.7–2.9和0.7–1.8 %。检测编码子719 GGC->AGC、编码子790 ACG->ATG、编码子858 CTG->CGG和外显子19缺失2236del15的突变获得同样的结果。

therascreen EGFR RGQ PCR Kit用于实时定量检测人EGFR基因编码子719、768、790、858和861的突变以及外显子19的缺失和复杂突变，在PyroMark Q24实时定量焦磷酸序列分析仪上使用焦磷酸测序技术检测。EGFR基因可编码表皮生长因子受体（EGFR）蛋白。EGFR基因酪氨酸激酶结构域的突变能够促进肿瘤的生长和增殖。在美国有近10%的非小细胞肺癌患者发现了EGFR基因突变，在东亚该比例达到35%。除此之外，6%的脑瘤患者也发现了EGFR突变。

可检测以下种类的突变：

• 外显子18 (719)：G719A、G719C、G719S
• 外显子19 (Del)：20缺失和复杂突变
• 外显子20 (768和790)：S768I、T790M
• 外显子21 (858–861)：L858R、L861Q、L861R

可手动检测和分析更多突变。

使用针对外显子18、19、20、21的引物进行PCR扩增后，将扩增子固定在高性能链霉素亲和琼脂糖上。将单链DNA和相应序列的引物退火处理得到DNA。然后在PyroMark Q24 System上设置程序和运行程序对样品进行分析。

推荐使用EGFR Plug-in Report分析结果。报告确保使用正确的LODs并自动分析不同序列，以检测所有的突变和确实。当然，也可选用PyroMark Q24实时定量焦磷酸序列分析仪自带的分析工具来分析。运行后可以通过调节"Sequence to Analyze"来检测外显子19的不同缺失和其他外显子的稀有突变。

therascreen EGFR Pyro PCR Kit用于实时定量检测人EGFR基因编码子719、768、790、858和861的突变以及外显子19的缺失和复杂突变。此试剂盒用于辅助鉴定酪氨酸激酶抑制治疗法对癌症患者是否有效。

可检测以下种类的突变：

• 外显子18 (719)：G719A、G719C、G719S
• 外显子19 (Del)：20缺失和复杂突变
• 外显子20 (768和790)：S768I、T790M
• 外显子21 (858–861)：L858R、L861Q、L861R

可手动检测和分析更多突变。