therascreen NRAS Pyro Kit

• 符合欧洲体外诊断98/79/EC指令
• 实时获得多个结果
• 准确定量NRAS基因中的突变
• 简单说明复杂的序列信息

线性

将载有编码子12和13 GGT->GAT和编码子61 CAA->CGA的突变的质粒和野生型基因的质粒混合测量其线性（参见"Linearity of GGT->GAT mutation"）。这些质粒以四种不同的突变质粒比例（5、10、30、50%）混合。每种质粒混合物用三种不同量的therascreen NRAS Pyro Kit使用焦磷酸测序技术进行分析，重复分析三次。

检测5–50%突变范围时，含有5%的容许非线性度的结果是线性的。检测编码子13 GGT->GAT和编码子61 CAA->CGA的突变获得同样的结果。

精密度

精密度用于检测这些试验的总的差异，对如上所述的质粒混合物进行三个不同水平的分析，每个混合物重复测量三次以获得精密度数据。

重复性（批内和批间差）基于线性测定数据计算得出（用不同的therascreen NRAS Pyro Kit在同一天测定三次）。中间精密度（实验室内部差异）由同一实验室三次检测得出，这三次检测分别由不同的操作者用不同的PyroMark Q24实时定量焦磷酸序列分析仪以及不同的therascreen NRAS Pyro Kit在不同的三天进行。重现性（实验室之间的差异）由使用不同的therascreen NRAS Pyro Kit在两个不同的实验室分别进行检测得出。

在5–50%的突变测量范围内，编码子12 GGT>GAT的突变检测的重复性、中间精密度和重现性分别为1.2–1.9%、1.0–2.0%、1.3–3.1%。检测编码子13 GGT->GAT和编码子61 CAA->CGA的突变获得同样的结果。

therascreen NRAS Pyro Kit用于实时定量检测人NRAS基因编码子12、13和61的突变，在PyroMark Q24实时定量焦磷酸序列分析仪上使用焦磷酸测序技术检测。NRAS基因编码一种GTPase，该酶是成神经细胞瘤RAS病毒（v-ras）原癌基因同源物。 在所有恶性黑素瘤中，有将近13–25%发生NRAS基因突变，通常在编码子12、13和61突变。这些突变激活了NRAS信号通路。 

可检测以下种类的突变：

• 编码子12/13：G12A、G12C、G12D、G12R、G12S、G12V、G13A、G13C、G13D、G13R、G13S和G13V
• 编码子61：Q61E、Q61H、Q61K、Q61L、Q61P和Q61R

使用针对编码子12/13和编码子61的引物对两个片段PCR扩增后，将扩增子固定在高性能链霉素亲和琼脂糖上。将单链DNA和相应序列的引物退火处理得到DNA。然后在PyroMark Q24实时定量焦磷酸序列分析仪上设置程序和运行程序对样品进行分析。运行后可以通过调节"Sequence to Analyze"来检测稀有突变（参见"Pyrogram trace of a GGT to AGT mutation in base 1 of codon 12"和"Pyrogram trace after reanalysis of the sample in the previous figure"）。

therascreen NRAS Pyro Kit用于定量检测人NRAS基因编码子12、13和61的突变。该试剂盒用于辅助鉴定癌症，然后采用特异性作用于NRAS基因或NRAS基因起关键作用的信号通路的治疗方法进行治疗。

可检测以下种类的突变：

• 编码子12/13：G12A、G12C、G12D、G12R、G12S、G12V、G13A、G13C、G13D、G13R、G13S和G13V
• 编码子61：Q61E、Q61H、Q61K、Q61L、Q61P和Q61R