dPCR CNV Probe Assay

• 200 多个靶标基因检测方案已进行过湿实验验证，从而确保卓越的性能
• 染料可配置性支持在每个反应中对最多 5 个靶标进行多重检测
• 可提供目标基因检测、参比基因检测和着丝粒参比基因检测
• 已针对一系列样本（例如 FFPE、细胞系和 gDNA）进行了即用型检测验证
• 在 QIAcuity 仪器上实现简单快速的 dPCR 工作流程
• 可方便地使用 QIAcuity Software Suite 进行拷贝数数据分析

dPCR CNV Probe Assay可让您针对个体基因或目标区域进行特异、准确、可重复且易于解读的拷贝数改变分析。200 多个靶标基因检测方案经过 dPCR 湿实验验证，并在特定检测方案说明中进行了标记。

dPCR CNV Probe Assay以管装形式提供，是即用型 20x 浓缩检测方案管内包含引物对和水解探针，可与 QIAcuity Probe PCR Kit （DNA 靶标）、QIAcuity Digital PCR System 和 QIAcuity Nanoplate 配套使用。

每种检测方案都有五种不同水解探针（荧光基团）供选择：FAM、HEX、ROX、Atto 550 和 Cy5。这种灵活性允许对不同的检测方案进行混合和匹配，以便在单个 dPCR 反应中对最多五个靶标基因进行多重分析。

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出色的检测性能

在使用两种不同 gDNA 模板浓度进行的双重分析中，dPCR CNV Probe Assay显示出良好的产物扩增以及阴性和阳性反应簇之间的分离（参见 KRAS 和 TERT 检测双重反应的一维和二维散点图）。结果表明，即使在 gDNA 输入浓度很低时，也能够对 CNV 进行准确分析。有关Nanoplate 8.5k的最小和最大装载量，请查看 QIAcuity 用户手册扩展版。

使用数字 PCR 进行精确和可重复的拷贝数分析

高度可重复的 QIAcuity dPCR 系统和 dPCR CNV Probe Assay 允许在无需重复测试的情况下进行 CNV 分析，以经济高效的方式增加了样本通量。对 gDNA 样本进行的双重分析时，在所有复本中都得到了每个基因组的预期拷贝数（参见“在双重反应中进行准确和可重复的拷贝数分析”）。在分析 gDNA 系列稀释的精密度测试中，该检测方案显示出良好的线性分布和簇分离（参见“系列稀释精密度测试中的线性分布”）。

通过 dPCR 进行多重拷贝数分析

使用 dPCR CNV Probe Assay 进行多重分析可提高通量，并显著降低每个靶标的分析成本。通过订购使用不同染料标记（FAM、HEX、ROX、Atto 550 和 Cy5）的检测方案，可以在单个反应中同时对最多 5 个靶标基因进行灵活的实验设计和多重分析。dPCR CNV Probe Assay在单个反应中进行 5 重检测显示出极好的扩增性能以及阳性和阴性簇的分离（参见“在 5 重反应中进行 CNV 检测”）。

所有 dPCR CNV Probe Assay均针对人类基因组的独特区域而设计。dPCR CNV Probe Gene of Interest Assay 靶向广泛研究的癌症及癌症相关基因。dPCR CNV Probe Reference Assay和 dPCR CNV Probe Centromeric Reference Assay 包括每个基因组具有不同拷贝数的各种参比基因，从而可让您针对各项分析选择最佳的归一化参考基因。根据实验条件，在反应中可以包括多种 GOI 和参比检测，以准确计算目标基因或靶标的拷贝数。

dPCR Copy Number Probe Assay为即用型：只需将单项检测混合物添加到 QIAcuity Probe PCR Kit 的 DNA 样本和预混液中，加载入 QIAcuity Nanoplate中，然后即可在 QIAcuity 仪器上开始运行。每种检测方案都是基于人类基因组中特定基因区域的终点 PCR 扩增。使用靶标特异性荧光水解探针检测扩增产物，这有助于确保检测的高度特异性。

有关纳米微孔板中 dPCR 反应的原理说明，请参见这里。

实验设置步骤简单明了，可以在任何有着 QIAcuity dPCR 仪器的实验室中进行。为了进行更精确的拷贝数分析，我们建议采用限制性酶消化法从样本中分离基因组 DNA。高度片段化的 DNA（例如 FFPE DNA 或循环 DNA）或 cDNA 不需要限性消化。要直接在反应混合物中进行限性消化，请在反应体系构建期间加入推荐的限制性酶。关键是要避免使用在目标扩增子区域内切割的限制性酶。

然后将片段化的模板与即用型 QIAcuity Probe PCR Kit 预混液和 dPCR CNV Probe Assay 混合，并将此混合物分装至 dPCR 预孔板的每个孔中。然后通过移液管吹打将反应混合物充分混匀，并转移到 QIAcuity Nanoplate的孔中。通过与不同的荧光基团结合，可以实现单孔中多重反应，对每个目标基因或靶标以及每个参比检测进行分析。

加载并密封纳米微孔板后，在 QIAcuity 仪器上运行推荐的循环程序。获得的每微升拷贝数结果显示在 QIAcuity Software Suite 的绝对定量分析类型中。要计算每个基因组的拷贝数，在 QIAcuity Software Suite 中选择拷贝数数据分析类型，并定义纳米微孔板孔中为基因/目标区域或归一化参比基因。根据扩增方案，dPCR 运行的结果可以在大约 2 小时后使用 QIAcuity Software Suite 进行分析。

dPCR CNV Probe Assay 非常适合用于使用来自新鲜、冰冻或固定样本的 DNA来 检测单个基因座的拷贝数改变或变异。