Taq 喜欢高温,有些从一开始就喜欢高温
大多数体外扩增应用使用耐热酶进行聚合酶链反应 (PCR)。最常用的 PCR 酶是 Taq DNA 聚合酶。Taq DNA 聚合酶来源于 Thermus aquaticus,这是一种在 70°C 以上温度下生长的极端嗜热真杆菌。这意味着 Taq DNA 聚合酶在大约 72°C 温度下发挥最佳酶活性。
标准 PCR 还是热启动?
标准 Taq 聚合酶在 72°C 时发挥最佳活性,但在 37°C 左右就开始表现出活性。这种低温活性不容忽视,因此具有在 PCR 反应的初始较低温度阶段允许非特异性扩增和误引发事件的缺点。如果您需要实现 PCR 自动化,那么可以考虑使用热启动 Taq 聚合酶。
热启动聚合酶与标准 Taq 不同,它在常温下没有活性。热启动 PCR 技术遵循与常规 PCR 相同的原理,但直到完成第一个变性步骤之前,酶活性始终处于抑制状态。这最大限度减少了非特异性结合和误引发,从而提高了特异性。此外,该技术提供了在室温下构建反应体系的显著便利性,使得 PCR 自动化成为可能。在某些情况下,灵敏度也会提高,因为非特异性扩增会大量消耗特异性目标扩增所需的反应体系组分。
所有 Taq 聚合酶适用于:
根据您对标准 PCR 或适用于自动化和高通量 PCR 应用的热启动酶的要求,选择 Taq DNA 聚合酶。
酶试剂 | 特点 | 附带 | |||||
---|---|---|---|---|---|---|---|
热启动 (x min @ 95°C) |
扩增子大小 | 延伸速度 | 5’-3’ 核酸外切酶 |
PCR 缓冲液 | 上样缓冲液 | ||
P7250L Taq-B (Taq) |
即将推出 | ✘ 否 | <5 kb |
2–4 kb/min (72°C) |
✔ 是 | ✘ 否 | ✘ 否 |
P7620L TaqIT *(Stoffel) |
即将推出 | ✘ 否 | <7 kb | 2–4 kb/min (72°C) |
✘ 否* | ✔ 是 | ✘ 否 |
201203 Taq |
✘ 否 | <7 kb | 2–4 kb/min (72°C) |
✔ 是 | ✔ 是 + Q‑Solution | ✔ 是 | |
201223 Taq PCR Core Kit |
✘ 否 | <7 kb |
2–4 kb/min (72°C ) |
✔ 是 | ✔ 是 + dNTPs | ✔ 是 | |
203123 AllTaq PCR Core Kit |
✔ 是 (2 min.) | <9 kb | 1 min/kb (68°C) |
✔ 是 | ✔ 是 + dNTPs | ✔ 是 | |
203203 HotStarTaq |
✔ 是 (15 min.) | <7 kb | 2–4 kb/min (72°C) |
✔ 是 | ✔ 是 + Q‑Solution | ✘ 否 |
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