Enzymes, NGS, Black male scientist looking at test-tube filled with substance in a laboratory setting
分子生物学用酶试剂

PCR 和 DNA 扩增

大多数体外扩增应用使用耐热酶进行聚合酶链反应 (PCR)。最常用的 PCR 酶是 Taq DNA 聚合酶。Taq DNA 聚合酶来源于 Thermus aquaticus,这是一种在 70°C 以上温度下生长的极端嗜热真杆菌。这意味着 Taq DNA 聚合酶在大约 72°C 温度下发挥最佳酶活性。 

标准 Taq 聚合酶在 72°C 时发挥最佳活性,但在 37°C 左右就开始表现出活性。这种低温活性不容忽视,因此具有在 PCR 反应的初始较低温度阶段允许非特异性扩增和误引发事件的缺点。如果您需要实现 PCR 自动化,那么可以考虑使用热启动 Taq 聚合酶。

热启动聚合酶与标准 Taq 不同,它在常温下没有活性。热启动 PCR 技术遵循与常规 PCR 相同的原理,但直到完成第一个变性步骤之前,酶活性始终处于抑制状态。这最大限度减少了非特异性结合和误引发,从而提高了特异性。此外,该技术提供了在室温下构建反应体系的显著便利性,使得 PCR 自动化成为可能。在某些情况下,灵敏度也会提高,因为非特异性扩增会大量消耗特异性目标扩增所需的反应体系组分。

所有 Taq 聚合酶适用于:

根据您对标准 PCR 或适用于自动化和高通量 PCR 应用的热启动酶的要求,选择 Taq DNA 聚合酶。
酶试剂   特点 附带

  热启动
(x min @ 95°C)
扩增子大小 延伸速度 5’-3’
核酸外切酶
PCR 缓冲液 上样缓冲液
P7250L
Taq-B (Taq)

即将推出 ✘ 否 <5 kb
2–4 kb/min
(72°C)
✔ 是 ✘ 否 ✘ 否
P7620L
TaqIT *(Stoffel)

即将推出 ✘ 否 <7 kb 2–4 kb/min
(72°C)
✘ 否* ✔ 是 ✘ 否
201203
Taq

  ✘ 否 <7 kb 2–4 kb/min
(72°C)
✔ 是 ✔ 是 + Q‑Solution ✔ 是
201223
Taq PCR Core Kit

  ✘ 否 <7 kb
2–4 kb/min
(72°C )
✔ 是  ✔ 是 + dNTPs ✔ 是
203123
AllTaq PCR Core Kit

  ✔ 是 (2 min.) <9 kb 1 min/kb
(68°C)
✔ 是 ✔ 是 + dNTPs ✔ 是
203203
HotStarTaq
  ✔ 是 (15 min.) <7 kb 2–4 kb/min
(72°C)
✔ 是 ✔ 是 + Q‑Solution ✘ 否
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