therascreen KRAS Pyro Kit

基于测序的方法定量检测KRAS基因中癌症相关的突变

特点

符合欧洲体外诊断98/79/EC指令
实时获得多个结果
准确定量KRAS基因中的突变
简单说明复杂的序列信息

产品详情

therascreen KRAS Pyro Kit是用于鉴定KRAS基因中突变和缺失的分子检测试剂盒。该试剂盒包含扩增KRAS基因所需的引物和试剂，以及在PyroMark Q24实时定量焦磷酸序列分析仪上使用焦磷酸测序技术实时定量检测突变所需的缓冲液、引物和试剂。

绩效

线性

线性依据CLSI Guideline EP6-A"线性定量测定步骤评估：统计学方法；经验证的指南"来确定。
将载有突变序列的质粒和野生型基因的质粒以四种不同突变质粒的比例：0、12.5、25、37.5和50%混合。每种质粒混合物四个重复样本随机放在板上分析。得出编码子12 GGT->TGT的突变结果。

精密度

编码子12 GGT->TGT的突变线性由3个不同的操作者在不同的三天使用不同的PyroMark Q24实时定量焦磷酸序列分析仪和试剂进行实验来确定。

检测0–50%突变范围，中间精密度（SD）的值为0.6–2.0%。

中间精密度
% 突变质粒	1（SD）	2（SD）	3（SD）	总值（SD）
0.0	0.6, 0.2	1.7, 0.7	0.7, 0.2	1.0, 0.6
12.5	13.3, 1.5	16.2, 1.9	14.6, 3.0	14.7, 1.4
25.0	23.8, 1.4	26.8, 2.4	26.9, 2.9	25.8, 1.8
37.5	42.0, 1.9	41.7, 0.5	38.5, 2.6	40.7, 2.0
50.0	49.7 2.4	50.5, 1.8	49.1, 4.8	49.8, 0.7

原理

therascreen KRAS Pyro Kit用于实时定量检测人KRAS基因编码子12、13和61的突变，在PyroMark Q24实时定量焦磷酸序列分析仪上使用焦磷酸测序技术检测。KRAS基因编码在EGFR信号通路中有重要作用的蛋白。KRAS基因的突变会影响蛋白对下游信号通路的激活。在所有癌症中有将近30%发生KRAS基因突变，其中直肠癌（35%）和肺癌（18%）。

可检测以下种类的突变：

编码子12/13：G12A、G12C、G12D、G12R、G12S、G12V和G13D
编码子61：Q61E、Q61H、Q61L和Q61R

程序

该试剂盒包含2部分实验：一个用于检测编码子12和13的突变；另一个用于检测编码子61的突变（参见"Illustration of the KRAS assay"和"Pyrogram trace of a normal genotype in codons 12 and 13"）。运用PCR技术对这两个片段分别进行扩增，测定特定区域的核酸序列。使用该法进行定量和定性分析时，特定区域周围的核酸序列峰被视为标准峰和参照峰。

使用针对编码子12/13和编码子61的引物对两个片段PCR扩增后，将扩增子固定在高性能链霉素亲和琼脂糖上。将单链DNA和相应序列的引物退火处理得到DNA。然后在PyroMark Q24实时定量焦磷酸序列分析仪上设置程序和运行程序对样品进行分析。推荐使用KRAS Plug-in Report进行分析。该报告确保使用正确的LOD和分析的不同序列可自动检测所有突变。也可在PyroMark Q24实时定量焦磷酸序列分析仪上使用其他分析工具进行分析（参见"Pyrogram trace of a GGT to GAT mutation in base 2 of codon 12"）。运行后可以通过调节"Sequence to Analyze"来检测稀有突变（参见"Pyrogram trace of a GGT to TGT mutation in base 1 of codon 12"和"Pyrogram trace of the reanalysis of the sample in the previous figure"）。

应用

therascreen KRAS Pyro Kit用于定量检测人KRAS基因编码子12、13和61的突变。该试剂盒用于辅助鉴定直肠癌，然后采用anti-EGFR治疗癌症。

可检测以下种类的突变：

编码子12/13：G12A、G12C、G12D、G12R、G12S、G12V和G13D
编码子61：Q61E、Q61H、Q61L和Q61R

辅助数据和图表

Pyrogram trace of a normal genotype in codons 12 and 13.

Pyrogram trace of a GGT to TGT mutation in base 1 of codon 12.

Pyrogram trace of a GGT to GAT mutation in base 2 of codon 12.

Pyrogram trace of the reanalysis of the sample in the previous figure.

资源

FAQ

Reconstiuted enzyme and substrate of PyroMark Gold Reagents, should not be vortexed since this could lead to conformational changes which affect the activity.

FAQ ID -2844