RNA 分析用酶试剂 | 逆转录酶和 RNA 连接酶

RNA 的一切：扩增、测序、连接和标记

有一套酶试剂可用于操纵 RNA 以进行基因表达的下游分析。逆转录酶从转录物中产生互补 DNA (cDNA)。可以对 cDNA 进行标记或扩增用于克隆或定量研究。RNA 连接酶可以连接碱基、标签和接头，RNA 聚合酶可以添加核糖核苷酸，核糖核酸酶可以去除核糖核苷酸。

通过扩增检测和操纵 RNA

逆转录酶是能够聚合与原始 RNA 模板互补的 DNA 链 (cDNA) 的酶。RNA 易被 RNase 降解，使用逆转录酶生产 cDNA 能够克服使用 mRNA 时面临的问题。cDNA 成为 RNA 研究（例如基因表达分析）的各种下游应用中的稳定模板。可以使用常规 PCR、qPCR、一步式 RT-qPCR 或等温方法进行 cDNA 模板的扩增。扩增后，可以使用常规酶方案进行克隆，或利用 T4 DNA 聚合酶的 3’→5’ 核酸外切酶活性进行不依赖于连接反应的克隆。

所有逆转录酶（RNA 依赖性 DNA 聚合酶）均可用于：

		RNase H (+/-)	专业应用
P7600L EnzScript	即将推出	-	用于长 cDNA 和具有高百分比全长 cDNA 的文库；需要模板切换的应用，即 RNA Seq
P7720L StableScript	即将推出	-	用于长 cDNA；提高了持续合成能力、抑制剂抗性和热稳定性（最佳温度 55°C）
205111 Omniscript Kit		+	微阵列标记；特别设计用于使用任何数量的 RNA 进行逆转录；优化的缓冲液；无需 RNase H 步骤

RNA 聚合酶和连接酶

RNA 聚合酶，或更具体地说是 DNA 导向的 RNA 聚合酶，是利用 DNA 模板合成 RNA 的酶。Poly(A) 聚合酶使用单链 RNA 作为引物，通过催化腺嘌呤残基掺入 RNA 的 3’ 末端，将 poly(A) 尾部添加到 RNA 中。

T4 RNA 连接酶在 RNA 分析中特别有用，尤其是高通量 RNA 测序和微阵列分析等上游程序。T4 RNA 连接酶 1 和 2 能够通过连接相邻的 3'-OH 和 5'-PO4 多核苷酸来标记、环化或执行 RNA 分子间连接。使用 T4 RNA 连接酶 1 将接头连接至 RNA 3’ 端是通过 RT-PCR 和高通量测序进行 RNA 定量和发现的第一步。

		作用	应用
P7180L T7 RNA Polymerase	即将推出	以 5’→ 3’ 方向从 DNA 模板合成 RNA；对 T7 启动子具有特异性	体外 mRNA 合成 RNA 探针标记 RNA 研究的 RNA 生成通过反义 RNA 进行表达控制 sgRNA 合成
P7460L Poly(A) Polymerase	即将推出	催化 AMP 从 ATP 添加到 RNA 的 3’-OH，以获得具有 poly(A) 尾部的 RNA	使用 ATP 或虫草素对 RNA 进行 3' 标记对 RNA 添加 Poly(A) 尾部 Poly(A) 尾部增强转移到真核细胞中的 RNA 的翻译
L6050L T4 RNA Ligase 1	即将推出	单链 RNA 连接酶；也连接单链 DNA 分子	单链 RNA 或 DNA 的连接单链 RNA 或 DNA 的 3'-末端标记
L6080L T4 RNA Ligase 2	即将推出	连接 dsRNA 中的缺口；将 RNA 的 3’-OH 连接到双链杂合体中的 DNA 的 5’-PO4	多个寡核苷酸的模板连接含有特定位点修饰或标记的 RNA 的合成 dsRNA 的缺口连接连接 DNA/RNA 双链体中 RNA 的 3’-OH 与 DNA 的 5’-PO₄
L6070L T4 RNA Ligase 2 (Truncated)	即将推出	催化预腺苷酸化 5’ 磷酸（DNA 或 RNA）与 RNA 的 3’ 羟基之间的磷酸二酯酶键形成	通过连接头将预腺苷酸化 5’ DNA 连接至 3’ 羟基 RNA 小 RNA 克隆和测序

消化 RNA 和保护 RNA

核糖核酸酶保护实验 (RPA) 是一种使用 RNase A 测定相对或绝对转录物丰度以及绘制 mRNA 末端和内含子/外显子边界的技术。

单碱基置换可以通过一种涉及对 RNA:DNA 异源双链中的单碱基错配进行 RNase A 剪切的简单酶方法进行检测和定位。

		作用	应用
19101 RNase A		在 C 和 U 残基处降解 ssRNA 的核糖核酸内切酶*	测定相对或绝对转录物丰度绘制 mRNA 末端和内含子/外显子边界 (RPA) 绘制 DNA 或 RNA 中的单碱基突变去除质粒和基因组 DNA 制剂中的 RNA 去除重组蛋白制剂中的 RNA
Y9220L RNase H	即将推出	用于水解与 DNA 杂交的 RNA 的磷酸二酯键的核糖核酸内切酶	RNase H 活性可降解 DNA:RNA 复合体的 RNA 模板，从而释放单链 cDNA 作为合成第二链 cDNA 的模板
Y9240L RNase Inhibitor	即将推出	RNase A、B、C 的猪源性非竞争性抑制剂；不抑制 RNase H 活性。	保护 RNA 不被降解；通常用作 RNA 酶法操纵的预防措施

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