Hinzufügen von internen Markern oder Endmarkierungen
DNA kann auf zwei Arten mit Enzymen markiert werden: an den Enden oder intern entlang des Moleküls. Nachweisbare Marker wie Fluorophore oder modifizierte Nukleotide können durch das Anhängen von 5’- und 3’-Gruppen mithilfe von Enzymen oder durch das Einbringen interner Marker durch direkten Einbau oder Postmarkierungstechniken mit einem geeigneten Enzym eingebracht werden.
Enzymstrategien für das Einbringen von Markierungen in Nukleinsäuren
Die Markierung durch die Aktivität eines Enzyms ist für viele Studien erforderlich, die das Ziel haben, die Funktionen und Dynamik von Nukleinsäuren in vitro und in Zellen zu erforschen. Für jede Stelle, an der markierte Nukleotide in DNA oder RNA integriert werden können, gibt es ein geeignetes Enzym, das diese Aktion katalysiert.
| Produktname | DNA Polymerase I | Klenow Fragment | Klenow (3'-5'exo-) Fragment |
Mako DNA Polymerase |
T4 DNA Polymerase |
T7 DNA Polymerase |
|---|---|---|---|---|---|---|
| Beschreibung | Mesophile DNA- Polymerase |
Verkürztes Produkt von DNA-Polymerase I aus E. Coli |
Ein Derivat von DNA-Polymerase I aus E. Coli |
Exonukleasedefiziente Polymerase |
Verlängerung eines geprimten DNA- Templates in 5‘➞3‘ -Richtung |
Hoch prozessive DNA-Polymerase |
| Leistungsmerkmale | • 5‘➞3‘-DNA -Synthese |
• 5‘➞3‘ -Polymerase |
• 5‘➞3‘ -Polymerase |
• Keine Strangverdrängungsaktivität |
• Glätten der 5‘- und 3‘-Enden • Keine Strangverdrängung |
• Ausgesprochen hohe Genauigkeit bei Synthese und Replikation |
| Applikationen | DNA-Markierung mittels Nick-Translation, cDNA-Synthese |
DNA-Glättung mittels Auffüllen von 5‘-Überhängen, Zweitstrang- cDNA-Synthese, Sequenzierung und ortsspezifische Mutagenese |
A-Tailing für die NextGen -Sequenzierung, Strangverdrängungs- amplifikation, DNA-Markierung |
Sequenzierung | Markierung doppelsträngiger DNA |
Hoch prozessive, ortsspezifische Mutagenese, Zweitstrang- cDNA-Synthese |
| Exonuklease -Aktivität |
Exonuklease-Aktivität sowohl in 3‘➞5‘- als auch in 5‘➞3‘ -Richtung |
3‘➞5‘ -Exonuklease -Aktivität, keine 5‘➞3‘ -Exonuklease -Aktivität |
Geringe Nuklease -Aktivität beim Korrekturlesen (3‘➞5‘) und bei der Nick-Translation (5'➞3') |
Keine 3‘➞5‘- oder 5‘➞3‘ -Exonuklease -Aktivität |
Hohe 3‘➞5‘ -Exonuklease -Aktivität, keine 5‘➞3‘ -Exonuklease -Aktivität |
3‘➞5‘ -Exonuklease -Aktivität |
| Lyofähig, glycerinfrei |
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FAQs zur Markierung von Nukleinsäuren
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