Enzyme für PCR | Taq-Polymerase und Hot-Start-Taq

Taqs mögen es heiß und manche mögen es von Anfang an heiß

Die meisten Anwendungen im Bereich der In-vitro-Amplifikation arbeiten mit einem thermostabilen Enzym für die Polymerase-Kettenreaktion (PCR). Das am häufigsten verwendete PCR-Enzym ist die Taq-DNA-Polymerase. Die Taq-DNA-Polymerase stammt aus Thermus aquaticus, einem extrem thermophilen Eubakterium, das bei Temperaturen oberhalb von 70 °C wächst. Dies bedeutet, dass die optimale enzymatische Aktivität der Taq-DNA-Polymerase bei etwa 72 °C erreicht wird.

Standard-PCR oder Hot-Start-PCR?

Die Standard-Taq-Polymerase entfaltet ihre optimale Aktivität bei 72 °C, doch aktiv wird das Enzym schon ab etwa 37 °C. Die Aktivität bei niedrigeren Temperaturen ist beträchtlich und hat den Nachteil, dass sie unspezifische Amplifikationen und Mispriming-Ereignisse während der anfänglichen Niedrigtemperaturphase einer PCR-Reaktion zulässt. Für eine automatisierte PCR sollten Sie eine Hot-Start-Taq-Polymerase verwenden.

Im Gegensatz zur Standard-Taq sind Hot-Start-Polymerasen bei Raumtemperatur nicht reaktiv. Hot-Start-PCR-Techniken folgen denselben Prinzipien wie die konventionelle PCR, jedoch wird die enzymatische Aktivität bis zum Ende des ersten Denaturierungsschritts unterdrückt. Dies minimiert die unspezifische Bindung und das Mispriming, was die Spezifität verbessert. Darüber hinaus bietet diese Technik den großen Vorteil, dass die Reaktionen bei Raumtemperatur angesetzt werden können, was eine Automatisierung der PCR ermöglicht. In einigen Fällen verbessert sich sogar die Sensitivität, da durch die unspezifische Amplifikation die für die spezifische Zielamplifikation erforderlichen Reaktionskomponenten verbraucht werden.

Alle Taq-Polymerasen eignen sich für:

Wählen Sie je nach Ihren Anforderungen eine Taq-DNA-Polymerase für die Standard-PCR oder ein Hot-Start-Enzym für die Automatisierung und für PCR-Anwendungen mit hohem Durchsatz.

Enzym		Merkmale				Lieferung mit
		Hot-start (X min @ 95 °C)	Amplifikatgröße	Verlängerungsrate	5’-3’- Exonuklease	PCR-Puffer	Ladepuffer
P7250L Taq-B (Taq)	Demnächst erhältlich	✘ Nein	< 5 kb	2–4 kb/min bei 72 °C	✔ Ja	✘ Nein	✘ Nein
P7620L TaqIT *(Stoffel)	Demnächst erhältlich	✘ Nein	< 7 kb	2–4 kb/min bei 72 °C	✘ Nein*	✔ Ja	✘ Nein
201203 Taq		✘ Nein	< 7 kb	2–4 kb/min bei 72 °C	✔ Ja	✔ Ja + Q‑Lösung	✔ Ja
201223 Taq PCR Core Kit		✘ Nein	< 7 kb	2–4 kb/min bei 72 °C	✔ Ja	✔ Ja + dNTPs	✔ Ja
203123 AllTaq PCR Core Kit		✔ Ja (2 min)	< 9 kb	1 min/kb bei 68 °C	✔ Ja	✔ Ja + dNTPs	✔ Ja
203203 HotStarTaq		✔ Ja (15 min)	< 7 kb	2–4 kb/min bei 72 °C	✔ Ja	✔ Ja + Q‑Lösung	✘ Nein

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