Enzymes, NGS, Male Caucasian scientist working with scientific equipment in a laboratory setting
Enzimas para biología molecular

Marcaje de ácidos nucleicos

Adición de marcadores internos o marcajes en los extremos

Existen dos maneras de etiquetar ADN con enzimas: en los extremos o internamente a lo largo de la molécula. Los marcadores detectables tales como fluoróforos o nucleótidos modificados pueden ser introducidos mediante de la adición de grupos de 5’ y 3’ a través de la acción enzimática, y también mediante la introducción de marcadores internos a través de técnicas de incorporación directa o postetiquetado con una enzima adecuada.

Estrategias enzimáticas para añadir etiquetas a los ácidos nucleicos

Se requiere el marcaje por acción de una enzima en muchos estudios destinados a dilucidar las funciones y la dinámica de los ácidos nucleicos in vitro y en las células. Por cada sitio donde pueden añadirse nucleótidos marcados al ADN o ARN, hay una enzima adecuada que puede catalizar la adición.

Nombre del producto DNA Polymerase I Klenow Fragment Klenow (3'-5'exo-)
Fragment		 Mako DNA
Polymerase		 T4 DNA
Polymerase		 T7 DNA
Polymerase
Descripción ADN polimerasa
mesofílica 		 Producto truncado
de E. coli DNA
polymerase I 		 Derivado de
E. coli DNA
polymerase I		 Polimerasa
con deficiencia de
exonucleasa 		 Extensión de un
molde de ADN
cebado en
la dirección 5'➞3'		 ADN polimerasa
altamente procesiva
Características • Síntesis de ADN 5'➞3'
 • Polimerasa 5'➞3'
 		 • Polimerasa 5'➞3'
 • Sin actividad
de desplazamiento
de la cadena		 • Pulido 5' y
3' de los extremos
• Sin desplazamiento
de la cadena		 • Tasa
excepcionalmente alta
de síntesis y fidelidad de
replicación
Aplicaciones Marcado de ADN mediante
desplazamiento de mellas,
síntesis de ADNc		 Reducción de ADN mediante
llenado de la saliente 5’,
síntesis de ADNc
bicatenario,
secuenciación y
mutagénesis
específica del sitio 		 Adición de nucleótido “A” para secuenciación
NextGen
, amplificación de
desplazamiento
de cadenas,
marcado de ADN		 Secuenciación Marcado de
ADN bicatenario 		 Mutagénesis
específica del sitio
altamente procesiva,
síntesis de ADNc
bicatenario
Actividad de
exonucleasa		 Actividad de
exonucleasa
3'➞5' y
5'➞3'
 Actividad de
exonucleasa
3'➞5', sin actividad de
exonucleasa
5'➞3'
 Deficiente en
las actividades de nucleasa
de detección de errores
(3'➞5') y
desplazamiento
de mellas (5'➞3')		 Sin actividad de
exonucleasa
3'➞5' o
5'➞3'
 Potente actividad de
exonucleasa
3'➞5', sin actividad de
exonucleasa
5'➞3'		 Actividad de
exonucleasa
3'➞5'
Listo para liofilización,
libre de glicerol		 ✔
 ✔
 ✔
✔  

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