QIAcuity Cell and Gene Therapy (CGT) dPCR Assays

Para la valoración del genoma del vector con precisión, reproducibilidad y velocidad superiores en el QIAcuity Digital PCR System

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dPCR CGT Assay GFP (FAM)

Cat. No. / ID:   250236

Para 500 reacciones de 12 µl (20 unidades): Ensayo Cell and Gene Therapy de QIAGEN para GFP para ser utilizado con el sistema de dPCR QIAcuity.
25.390,00 MXN
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Assay
GFP
ITR2/5
bGH polyA
WPRE
SV40 promoter
SV40 polyA
CMV promoter
hGH polyA
CMV enhancer
AMP resistance
Dye
FAM
HEX
Cy5
El dPCR CGT Assay GFP (FAM) está concebido para su uso en aplicaciones de biología molecular. Este producto no está concebido para el diagnóstico, la prevención ni el tratamiento de enfermedades.

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Features

  • Una amplia oferta de diez ensayos diferentes de dPCR CGT validados en laboratorio húmedo
  • Los ensayos con diferentes opciones de fluoróforos permiten el multiplexado para obtener más información de una muestra
  • Un flujo de trabajo fácil y rápido en comparación con qPCR

Product Details

El virus adenoasociado (AAV) es un vector vírico ampliamente usado en aplicaciones de tratamiento génico. Sin embargo, la generación y purificación de los vectores víricos requiere un riguroso control de calidad para permitir una dosificación segura y fiable durante los estudios clínicos o la atención a los pacientes. La capacidad para cuantificar de manera precisa las concentraciones del vector y detectar contaminación es esencial para aplicar tratamientos génicos basados en AAV seguros y eficaces.

Performance

Los QIAcuity Cell and Gene Therapy dPCR Assays son una amplia oferta de diez ensayos de dPCR CGT diferentes validados en laboratorio húmedo que se presentan en múltiples fluoróforos, lo que permite una precisión, una reproducibilidad y un rango dinámico superiores de al menos 4 órdenes de magnitud con velocidad en la medición de concentraciones víricas en una configuración multiplexada. Los ensayos funcionan junto con el QIAcuity Digital PCR System, el QIAcuity Probe PCR Kit y las QIAcuity Nanoplates, lo que ofrece un flujo de trabajo de dPCR constante comparable a la qPCR, pero proporciona una cuantificación absoluta de las copias del genoma del vector de AAV en su muestra. Los ensayos se han diseñado teniendo en cuenta los requisitos de fabricación biofarmacéutica y el CC.

Principle

El principio de la reacción de dPCR en las nanoplacas se describe aquí.

Los ensayos de CGT especializados permiten la cuantificación de AAV en el QIAcuity. Estos ensayos se validan y se pueden usar en reacciones simples y múltiples y, además, se pueden combinar con ensayos de genes de interés, lo que ofrece:

  • Una cuantificación exacta por debajo de 0,3 copias/µl
  • Precisión elevada sobre un amplio rango dinámico
  • Exactitud elevada en todos los ensayos (independientemente de los fluoróforos) y operadores
  • Precisión elevada (<10 % de desviación de la media) independientemente de los fluoróforos y los operadores
  • Compatibilidad con los datos de dPCR y qPCR

Procedure

Los QIAcuity Cell and Gene Therapy dPCR Assays se proporcionan en una mezcla de sonda-cebador lista para usar de 20x, disponible en diversas opciones de fluoróforo, y están optimizados para usarse con el QIAcuity Probe PCR Kit. Estos ensayos permiten aplicaciones de CGT simples y múltiples, lo que incluye una cuantificación absoluta de la concentración del vector y la robustez del ensayo

Applications

Los QIAcuity Cell and Gene Therapy (CGT) dPCR Assays se usan para diversas aplicaciones, lo que incluye mediciones de la concentración del vector vírico, la medición de la integridad del genoma del vector y la determinación de la posible contaminación del plásmido si se utilizan plásmidos Amp para la producción de AAV. La incorporación de estos ensayos de dPCR CGT al proceso de control de calidad del desarrollo del tratamiento génico supone una mayor certeza en la producción de tratamientos seguros y potentes.

Supporting data and figures

FAQ

Do I need to use restriction enzymes when quantifying AAV genomes?

In some cases, it is recommended to perform a digest with compatible restriction enzymes. For example, when quantifying ITRs, the strong secondary structure of the terminal repeats might affect titration. Compatible restriction enzymes are indicated in the corresponding data sheets of the CGT dPCR assays.

FAQ ID - 3866
How can I resuspend the lyophilized assay?

Please resuspend the lyophilized assays in 330 µl TE buffer to obtain a 20× stock. Additional information can be found in the QSP and the data sheets.

FAQ ID - 3864
Any recommendations on how can I process my AAV samples?
Are the assays also compatible with qPCR?

Yes. The assays can also be used for vector genome titration in a qPCR.

FAQ ID - 3871
Can I use the CGT dPCR assays for the titer determination of RNA viruses?

Yes, you can. cDNA would be used in this case for quantification.

FAQ ID - 3869
In which channels can you detect the CGT dPCR assays?

Most of the assays are offered with a FAM, HEX, or Cy5 fluorophore, and can be detected in the Green, Yellow, or Crimson channel, respectively. SV40 poly A, hGH poly A, and Amp resistance assays are only available with a FAM or HEX fluorophore.

FAQ ID - 3863
How do I know if the assays are compatible with the sample DNA of interest?

An extended sequence context for each assay is provided in the corresponding data sheet. 

FAQ ID - 3870
Can they be used with lentiviral vectors?

Yes. The assays can also be used with lentiviral vectors. However, lentiviral vectors have an RNA genome. cDNA synthesis is crucial before performing the PCR for titer quantification.

FAQ ID - 3872
What quenchers are used?

The probes are double quenched with ZEN/TAO and IOWA black quenchers.

FAQ ID - 3865
Can I combine your CGT dPCR assays with custom designed assays?

Yes, the CGT dPCR assays can be used in singleplex and multiplex reactions. Custom designed assays can be added into a multiplex reaction according to customer needs.

FAQ ID - 3861
Can the CGT dPCR assays also be used for the analysis of AAV genome integrity?

Yes. When multiplexing different targets, it is possible to get additional information on genome integrity using the “Multiple occupancy” analysis in the QIAcuity Software Suite.

FAQ ID - 3867
Can the CGT dPCR assays also be used for the quantification of non-AAV samples?

Yes. They can be used as long as the assays match the region of interest.

FAQ ID - 3868
How many assays can be multiplexed?

Two to five assays can be combined into a multiplex reaction depending on the QIAcuity Digital PCR platform, hence the 2-plex or 5-plex instruments.

FAQ ID - 3862