QIAcuity OneStep Advanced Probe Kit

• La función HotStart RT permite la configuración simultánea de Nanoplate para QIAcuity Four y Eight
• Preparación de la reacción a temperatura ambiente gracias a la función HotStart RT
• Para reacciones simples y múltiples
• Mezcla maestra de PCR concentrada 4 veces para cargar más muestra
• Robustez avanzada contra inhibidores

El QIAcuity OneStep Advanced Probe PCR Kit permite la cuantificación sensible de dianas de ARN o ARN+ADN en el instrumento para PCR digital QIAcuity en una reacción de RT-PCR combinada. Contiene una mezcla maestra concentrada 4 veces y una mezcla RT concentrada 100 veces optimizada para el uso de microfluidos en las QIAcuity Nanoplates. El kit mejora la especificidad y la eficiencia de la PCR digital basada en sonda para ofrecer análisis exactos simples o hasta 5-plex.

El nuevo kit contiene una enzima de transcripción inversa (RT) HotStart, lo que permite la preparación de la reacción a temperatura ambiente y la configuración simultánea de las nanoplacas para su carga en los instrumentos QIAcuity Four o Eight.

El kit funciona junto con el QIAcuity Digital PCR System y las QIAcuity Nanoplates.

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Rendimiento avanzado de la transcripción inversa

La nueva QIAcuity Advanced Reverse Transcription Mix incluye la nueva tecnología de transcripción inversa HotStart pendiente de patente de QIAGEN. La nueva enzima HotStart RT no es funcional a temperatura ambiente y previene la generación de ADNc no diana incluso al dejarlo incubar a 37 °C durante muchas horas (consulte la figura  Análisis de la curva de disociación de la nueva HotStart RT). De esta forma, permite la preparación de la reacción a temperatura ambiente. La enzima HotStart RT permite a los usuarios montar sus reacciones a temperatura ambiente. Además, y lo más importante, la enzima HotStart RT permite a los usuarios montar y cargar múltiples nanoplacas en paralelo sin que tengan que preocuparse por una actividad de RT no deseada y posiblemente inespecífica mientras las placas esperan a temperatura ambiente. La enzima HotStart RT se bloquea mientras las nanoplacas esperan dentro del instrumento QIAcuity hasta que ser transferidas al termociclador, donde el paso de RT del protocolo tiene lugar.

El Enhancer GC incrementa el rendimiento de los ensayos específicos

El rendimiento del ensayo de dPCR depende de las secuencias y del diseño de los cebadores y sondas. El contenido GC y la longitud del amplicón varían dependiendo del catálogo de la industria y los ensayos personalizados. Los productos químicos para PCR se optimizan para el uso universal y el mejor rendimiento. Sin embargo, a veces se recomienda añadir potenciadores específicos. El nuevo Enhancer GC es un componente opcional (vial separado) que puede añadir a la reacción de dPCR cuando los amplicones son ricos en GC o su longitud no es superior a 150 nt. También se recomienda para su uso con los ensayos de expresión génica TaqMan (Thermo Fisher).

Tabla: Eficiencia de la RT con y sin Enhancer GC

Rendimiento de amplificación superior

El QIAcuity OneStep Advanced Probe Kit para dPCR basada en sondas de hidrólisis utiliza la versión más reciente de ADN polimerasa de alta calidad de QIAGEN. La combinación única de la patentada tecnología de tampón de eficacia comprobada de QIAGEN optimizada para microfluidos de nanoplacas, junto con el nuevo QuantiNova DNA Polymerase permite obtener resultados uniformes en lo que respecta a sensibilidad, reproducibilidad y eficacia.

Internal Control ARN (ARN de control interno)

El QIAcuity OneStep Advanced Probe Kit viene con un control interno de ARN de QuantiNova (QN IC RNA), que puede utilizarse opcionalmente como un control de transcripción inversa y de amplificación. El QuantiNova IC Probe Assay (200) (n.º de cat. 205813), disponible para su compra por separado, detecta el ARN de control interno de QuantiNova sobre un amplicón de 200 bp en el canal amarillo en el instrumento QIAcuity. Las secuencias del cebador y de la sonda para la detección del control interno de ARN de QuantiNova se han validado por vía bioinformática para su no homología con cientos de microorganismos eucariotas y procariotas. Además, se han probado de forma experimental con multitud de muestras de ARN humano y murino procedentes de varios tejidos y estirpes celulares.

NOTA: Los usuarios no deben comprar el QuantiNova IC Probe Assay Red 650 (500) (n.º de cat. 205824), ya que no está optimizado para funcionar con QIAcuity.

El QIAcuity OneStep Advanced Probe Kit contiene una mezcla maestra para PCR 4× lista para usar, lo que elimina la necesidad de optimizar la reacción y las condiciones de termociclado. La sustancia química de OneStep permite la RT y la amplificación del ARN vírico de interés en un solo paso. En la reacción OneStep, las dianas de ARN y ADN puede también detectarse juntas, por ejemplo, ARN vírico con ADN bacteriano.

El principio de la reacción de dPCR en las nanoplacas se describe aquí.

El QIAcuity OneStep Advanced Probe Kit contiene una mezcla maestra para PCR 4× lista para usar, lo que elimina la necesidad de optimizar la reacción y las condiciones de termociclado. Simplemente añada mezcla de RT 100×, ARN de molde y juegos de sonda y cebador a la mezcla maestra, y siga el procedimiento que se describe en el protocolo de inicio rápido para obtener resultados rápidos y fiables en el sistema QIAcuity. Con la nueva enzima HotStart RT, es posible la configuración paralela y la carga simultánea de varias nanoplacas en los instrumentos QIAcuity Four y Eight (consulte la figura  Configuración y carga de la nanoplaca).

El QIAcuity OneStep Advanced Probe Kit, combinado con el QIAcuity Digital PCR System y las QIAcuity Nanoplates, permite realizar un análisis cuantitativo de las dianas de ARN para varias aplicaciones, incluidas la detección de ARN vírico o ARNm. También son posibles las aplicaciones que requieren la detección simultánea de dianas de ARN y ADN, por ejemplo, en las pruebas de aguas residuales.