Aislamiento correcto de ARN de alta calidad a partir de suelo
El aislamiento de ARN a partir de suelo es una de las aplicaciones más difíciles realizadas en biología molecular ambiental. La degradación no solo es un desafío constante; además, el rendimiento de ARN tiende a ser bajo.
La posible cocontaminación del ARN por ácido húmico del suelo y contenido inhibidor también es un desafío. La pureza es esencial para las aplicaciones de ARN. El ARN debe estar concentrado al añadirlo a la reacción y no puede haber inhibidores presentes.
El rendimiento bajo de ARN, normalmente entre el 10 y el 20 % del rendimiento de ADN, significa que es necesario trabajar con una cantidad mayor de muestra para aislarla para investigación, con tubos más grandes (15 ml) y una centrifugadora con mayor capacidad. Puesto que es mejor evitar la dilución del ARN para transcripción inversa cuando se buscan genes de número reducido, la eliminación correcta del inhibidor es clave.
Para enfrentarse a estos desafíos, QIAGEN® ofrece el RNeasy® PowerSoil® Total RNA Kit, que se ha desarrollado especialmente para hacer que la extracción de ARN sea directa.
El protocolo es una combinación de métodos probada cuidadosamente: Inhibitor Removal Technology (IRT®) para eliminar los inhibidores, extracción con fenol-cloroformo para una lisis microbiana completa e intercambio aniónico para purificación de alta calidad. El resultado final es el aislamiento del ARN limpio en el volumen deseado, lo que permite un uso máximo en RT-PCR.
Desde el suelo limoso de un bosque al sedimento de un río, todos los suelos tienen una textura, una humedad y una carga microbiana diferentes. Con el RNeasy PowerSoil Total RNA Kit, puede adaptar el proceso de extracción para cada uno.
Diez consejos de aislamiento de ARN
Aquí tiene diez consejos para evitar problemas y optimizar los resultados siguiendo los pasos del protocolo RNeasy PowerSoil Total RNA Kit.