Ni-NTA Superflow 96 BioRobot Kit

• Purification entièrement automatisée de 2 mg maximum de protéine par puits
• Protéines d’une grande pureté sans contamination croisée
• Purification en conditions natives ou dénaturantes

Le Ni-NTA Superflow 96 BioRobot Kit permet la purification automatisée en parallèle de 300 µg maximum de protéines recombinantes provenant de 96 échantillons (protocole standard, 5 ml de volume de culture par échantillon). Les lysats cellulaires bactériens clarifiés traversent une plaque filtrante contenant le Ni-NTA Superflow que la BioRobot Workstation a préalablement chargé. Ce module unique de chromatographie d’affinité basée sur la chélation de métaux à 96 puits lie fortement et de façon sélective les protéines marquées à l’histidine (His). Des protocoles prêts à l’emploi sont proposés pour la purification en conditions natives ou dénaturantes.

Ses clients ayant besoin de quantités plus importantes de protéines avec les procédures automatisées, QIAGEN a adapté le protocole Ni-NTA Superflow 96 BioRobot de façon à pouvoir traiter des volumes de culture plus importants et à effectuer la purification de 2 mg maximum de protéines marquées à l’histidine (His) par puits. L’augmentation de la quantité de résine Ni-NTA Superflow utilisée dans la procédure jusqu’à 200 µl par puits et l’optimisation de la formulation du tampon de lyse permettent de traiter jusqu’à 25 ml (purification en conditions natives) ou 15 ml (purification en conditions dénaturantes) de cultures (protocoles à haut débit). Les cultures cellulaires sont transférées dans des blocs de 24 puits pour être traitées. L’augmentation correspondante de la biomasse peut accroître le rendement par puits des protéines pures marquées à l’histidine (His) (voir le tableau et l’illustration  Milligrammes de protéines marquées à l’histidine (His) par puits), cela permet de réaliser plusieurs dosages sur un même lot de protéines et de réduire le nombre total de préparations de protéines nécessaires, voir également l’illustration  Criblage avec expression automatisée. La purification en une étape donne des protéines infiniment pures sur toute une gamme de rendements, et la purification de grands complexes de protéines est possible.

Le QIAexpress Ni-NTA Protein Purification System, associé au Ni-NTA Superflow 96 BioRobot Kit, est basé sur la remarquable sélectivité de la résine brevetée Ni-NTA (Nickel-Acide nitrilotriacétique) pour les protéines contenant une étiquette d’affinité de six résidus d’histidine ou plus, le His-tag. Cette technologie permet une purification en une étape de quasiment toutes les protéines marquées à l’histidine à partir de n’importe quel système d’expression en conditions natives ou dénaturantes. Le NTA, qui présente quatre sites de chélation pour les ions nickel, lie le nickel plus étroitement que les systèmes de purification par chélation du métal, qui ne présentent que trois sites pour l’interaction avec les ions métalliques. Le site de chélation supplémentaire empêche la lixiviation des ions nickel et offre une plus grande capacité de liaison ainsi que des préparations des protéines d’une pureté supérieure à celle obtenue avec d’autres systèmes de purification par chélation du métal. Le système QIAexpress peut être utilisé pour purifier les protéines marquées à l’histidine à partir de n’importe quel système d’expression, y compris les baculovirus, les cellules de mammifères, les levures et les bactéries. (Voir l’illustration Purification des protéines à l’aide du système de purification des protéines Ni-NTA.)

Le Ni-NTA Superflow 96 BioRobot Kit s’utilise avec les stations de travail BioRobot 3000, 8000 ou 9600. .

Le QIAexpress Ni-NTA Protein Purification System permet une purification fiable en une étape des protéines, adaptée à de nombreuses applications, notamment :

• Étude des structures et des fonctionnements
• Cristallisation pour la détermination d’une structure tridimensionnelle
• Dosages impliquant des interactions protéine–protéine et protéine–ADN
• Immunisation aux anticorps produits