Opérez une transition en douceur vers une PCR de miARN supérieure

Notre objectif est de fournir les produits les plus innovants et de la meilleure qualité pour permettre aux scientifiques de surmonter les difficultés et de faire progresser leur recherche. Dans ce contexte, nous allons arrêter la production des produits miScript miRNA PCR le 1er mai 2021. Les produits miScript PCR continueront d’être disponibles après cette date jusqu’à épuisement des stocks, et nous recommandons aux utilisateurs de miScript PCR d’adopter nos systèmes miRCURY LNA miRNA PCR.

Les analyses de miARN par qPCR posent des problèmes spécifiques : leur faible abondance dans les types d’échantillons courants nécessite souvent une étape de préamplification, et leurs courtes séquences rendent très difficile la conception d’amorces et de sondes hautement spécifiques. Nos systèmes miRCURY LNA miRNA PCR répondent à ces problèmes en fournissant des profils de miARN solides et hautement sensibles sans préamplification, même pour les applications les plus exigeantes.

Les produits miRCURY LNA miRNA PCR procurent plusieurs avantages exclusifs :

• Sensibilité inégalée permettant la quantification à partir de seulement 1 copie de miARN
• Détection exacte dans les échantillons à faible teneur en miARN, comme le sérum ou le plasma, les coupes FFIP et les échantillons préparés par microdissection laser (LCM), sans préamplification
• Haute spécificité et capacité à distinguer entre miARN étroitement liés
• Personnalisation facile en ligne des dosages et panels
• Protocole simple et rapide ne prenant que 2 à 3 heures

miRCURY LNA PCR – lorsque la sensibilité, l’exactitude et la flexibilité sont déterminantes

Les systèmes miRCURY LNA miRNA PCR sont disponibles en deux versions : SYBR® Green et sonde. Ils combinent la rapidité et la commodité d’une réaction de transcription inverse universelle avec la sensibilité et la spécificité des amorces de qPCR aux performances augmentées par des LNA. La méthode simple est conçue pour permettre un profilage à haute performance des miARN et produit des résultats rapides et exacts pour tous les types d’échantillons, même ceux à faible teneur en ARN.

Adaptez la configuration expérimentale à vos besoins spécifiques à l’aide de dosages individuels ou de panels personnalisés entièrement flexibles. À l’aide de la même réaction d’ADNc, alternez sans heurts entre les dosages ou panels à amorces personnalisées ou préconçues. Notre gamme exceptionnelle de dosages et panels préconçus vous permet de détecter et de quantifier toutes les cibles, même les plus rares, avec une efficacité optimale.

Quantification exacte sans préamplification

La quantification des miARN en faible abondance par qPCR nécessite généralement une préamplification, mais les systèmes miRCURY LNA miRNA PCR fournissent des résultats exacts sans cette étape supplémentaire. Vous souhaitez connaître le secret ? Les dosages et panels miRCURY PCR contiennent des bases d’acide nucléique bloquées (LNA) positionnées de manière optimale. Les oligos aux capacités augmentées par des LNA présentent une plus grande affinité de fixation, permettant la conception d’amorces (et de sondes) très courtes qui sont à la fois spécifiques au miARN et suffisamment courtes pour empêcher le chevauchement lors de la fixation sur la séquence cible. Il serait impossible d’obtenir le même résultat avec des oligos traditionnels. Cela nous permet de concevoir un dosage optimal pour détecter tout miARN biologiquement pertinent avec une haute spécificité et sensibilité – sans nécessiter de préamplification.

Le système miRCURY LNA miRNA PCR a déjà permis à de nombreux scientifiques de faire progresser leur recherche. Vous souhaitez en savoir plus ? Cette équipe a utilisé notre système afin de découvrir de nouveaux miARN biomarqueurs pour le diagnostic précoce de l’ostéoporose. Ces chercheurs s’en servent pour détecter les signatures de miARN plasmatiques associés à des phénotypes liés à des maladies courantes chez l’homme. Nos Directives pour le profilage des miARN dans les liquides biologiquesexpliquent comment vérifier l’efficacité de votre PCR avec des ARN artificiels de contrôle (ARN spike-in) et présentent d’autres conseils et astuces pour réussir sans préamplification vos analyses par PCR des échantillons de liquides biologiques à faible teneur en miARN.

Si vous avez une application spécialisée qui requiert une préamplification, contactez nos experts pour plus d’assistance.

Vous avez le choix du procédé chimique de détection

Les dosages reposant sur SYBR® Green offrent une certaine souplesse de conception, un allègement de la configuration du dosage et des coûts de fonctionnement réduits, mais l’obtention de faux positifs dus à la fixation de ce colorant sur tous les ADN double brin pose problème à de nombreux chercheurs. Les faux positifs sont généralement dus à des conditions de PCR inappropriées, et non au procédé chimique de détection. De plus, puisque la détection à l’aide de SYBR® Green permet l’analyse de la courbe de fusion immédiatement après la PCR, vous pouvez confirmer la haute spécificité de la réaction et exclure la formation de dimères d’amorces ou d’amplicons non spécifiques.

Les sondes d’hydrolyse offrent une détection hautement sensible et robuste, car seul le produit de PCR souhaité est détecté. Néanmoins, la conception du dosage peut s’avérer complexe pour les courtes cibles comme les miARN, et il est souvent impossible de concevoir des amorces et sondes d’ADN oligos. En outre, des artéfacts d’amplification peuvent entrer en compétition pour les composants de la réaction, compromettant la sensibilité et l’efficacité du dosage, et réduisant le rendement en produit de PCR désiré.

Ces deux méthodes peuvent fournir d’excellents résultats, à condition d’utiliser un système de PCR hautement spécifique avec des amorces (et des sondes) bien conçues, ainsi que des conditions réactionnelles optimisées pour s’assurer que seules les cibles désirées sont amplifiées. Les dosages et panels miRCURY LNA miRNA PCR offrent des performances augmentées par des LNA, permettant de créer de très courtes amorces (et sondes) qui sont séparées dans l’espace, mais présentent une affinité et une spécificité extrêmement élevées. miRCURY LNA PCR assure la réussite de chaque analyse, sans faux positifs ni interférences dues aux dimères d’amorces.