粘着または平滑：修正、アニーリング、ライゲーション
クローニング技術とDNA組換え技術は、健康や疾患における遺伝子と細胞の働きについて多くの洞察をもたらしてきました。現在、クローニング技術とアプリケーションは、コンビナトリアルライブラリーのハイスループットアセンブリやエピジェネティック修飾のマッピングなどの革新的なアプリケーションにより、さらに進化しています。
クローニング用酵素
テンプレートDNAを適切なプラスミドベクターにクローニングする前に、末端修飾が必要になる場合があります。クローニング用に同定したDNAは通常、制限酵素消化またはPCR増幅によってソースから分離されます。 Klenow Fragment、T4 DNAポリメラーゼ、T4ポリヌクレオチドキナーゼなどの特殊な酵素は、3’または5’末端を修飾し、DNA断片とベクターの共有結合を改善します。
次のクローニングステップは、ベクターとインサートの末端をアニーリングするのに適した酵素を用いたライゲーションです。
テーリングは通常、TAクローニングに使用するT-ベクターの調製や、TAクローニングに使用するハイフィデリティポリメラーゼ（Taqではない）によって生成したPCR産物をAテーリングするために行われます。Taq DNAポリメラーゼ（Taq）による増幅産物は、すでにA-テーリングされています。
DNAの末端修飾用の酵素
DNAライゲーション用酵素
| Enzyme | Ligation | ||
|---|---|---|---|
| Ligation of sticky cohesive ends | Ligation of blunt ends | Nick sealing | |
| EN11 T4 DNA Ligase BLIRT |
✔ Yes | ✔ Yes | ✔ Yes |
| EN13 Tth DNA Ligase* | ✔ Yes | ✘ No | ✔ Yes |
これは、SLICのクローニング方法です
シークエンシングおよびライゲーション非依存性クローニング（SLIC）はエキソヌクレアーゼの酵素活性を利用します：
次世代シークエンシング用クローニング
次世代シークエンシングを目的とするライブラリは、断片化したDNAからスタートします。酵素の作用により、クローニングステップが完了します。
DNAライブラリー調整に必要なすべての酵素成分をアダプターで、「自家製」ライブラリー作成キットにアセンブリできます。
遺伝子合成
遺伝子合成は、長い相補的オーバーラップ領域を持つオリゴデオキシヌクレオチドの結合に基づいています。
クローニングおよびDNA組換用の注目の酵素をご覧ください
クローニングおよび組換え用酵素に関するFAQ
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