말단에 내부 마커 또는 라벨 추가
효소 DNA 라벨링에는 분자 말단 또는 분자 내부에 라벨링하는 두 가지 방법이 있습니다. 형광단 또는 변형 뉴클레오티드와 같은 검출 가능한 마커는 효소 작용을 통해 5’ 및 3’기를 추가하여 도입할 수 있을 뿐만 아니라 적절한 효소를 직접 결합하거나 사후 라벨링 기술을 통해 내부 마커를 도입할 수도 있습니다.
핵산에 라벨을 추가하기 위한 효소 전략
효소 작용에 의한 라벨링은 체외 및 세포 내 핵산의 기능과 역학을 규명하려는 많은 연구에 필요합니다. 라벨링된 뉴클레오티드가 DNA 또는 RNA에 추가될 수 있는 모든 부위에는 추가를 촉매할 수 있는 적절한 효소가 있습니다.
효소 | 작용 | 라벨링 작용 | ||||
---|---|---|---|---|---|---|
말단 라벨링 |
직접 결합 |
랜덤(Rnadom) 프라이밍 방식 |
갭 라벨 | 닉(nick) 번역 |
||
P7060L Klenow Fragment 출시 예정 |
5’→3’ |
✘ 아니요 | ✔ 예 | ✔ 예 | ✘ 아니요 | ✘ 아니요 |
P7010 Klenow(3’→5’ exo-) |
5’→3’ 합성 활성을 가진 DNA 중합효소 |
✔ 예(3’ dsDNA) | ✔ 예 | ✔ 예 | ✘ 아니요 | ✘ 아니요 |
P7260L T7 DNA polymerase 출시 예정 |
5’→3’ 합성 및 3’→5’ ssDNA 및 dsDNA 엑소뉴클레아제 활성을 가진 DNA 중합효소. [이중 가닥 DNA 엑소뉴클레아제 활성에는 티오레독신의 존재가 필요합니다.] |
✔ 예(5’ dsDNA) | ✔ 예 | ✘ 아니요 | ✔ 예 | ✘ 아니요 |
P7050L DNA polymerase I |
5’→3’ 합성, 5’→3’ 및 3’→5’ 엑소뉴클레아제 활성을 가진 DNA 중합효소 |
✘ 아니요 | ✘ 아니요 | ✘ 아니요 | ✘ 아니요 | ✔ 예 |
RP810 TaqNova Stoffel DNA Polymerase BLIRT |
5’→3’ 엑소뉴클레아제가 결핍된 Taq DNA 중합효소의 Stoffel Fragment 유도체 |
✘ 아니요 | ✔ 예 | ✘ 아니요 | ✘ 아니요 | ✘ 아니요 |
P7620L TaqIT DNA polymerase 출시 예정 |
TaqIT는 Taq DNA 중합효소(Stoffel)의 5’→3’ 엑소뉴클레아제 결핍 유도체입니다 |
✘ 아니요 | ✔ 예 | ✘ 아니요 | ✘ 아니요 | ✘ 아니요 |
P7070L Terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) 출시 예정 |
DNA 분자의 3' 수산기 말단에 dNTP를 추가하는 것을 촉매하여 평활(blunt) 5’-오버행 ssDNA 및 RNA를 연장합니다 |
✔ 예(3’ ssDNA) | ✘ 아니요 | ✘ 아니요 | ✘ 아니요 | ✘ 아니요 |
P7180L T7 RNA polymerase 출시 예정 |
DNA 템플릿의 5’→3’ 방향으로 RNA 합성 |
✘ 아니요 | ✔ 예(RNA) | ✘ 아니요 | ✘ 아니요 | ✘ 아니요 |
P7460L Poly (A) polymerase 출시 예정 |
폴리(A) 꼬리 RNA를 위해 ATP에서 RNA의 3’ 수산기에 AMP를 추가하는 것을 촉매합니다 |
✔ 예(3’ RNA) | ✘ 아니요 | ✘ 아니요 | ✘ 아니요 | ✘ 아니요 |
L6050L T4 RNA ligase 1 출시 예정 |
RNA와 ssDNA 분자를 라이게이션합니다 |
3’(RNA 및 ssDNA) | ✘ 아니요 | ✘ 아니요 | ✘ 아니요 | ✘ 아니요 |
Y9040L T4 polynucleotide kinase (PNK) |
γ-인산염을 ATP에서 폴리뉴클레오티드의 5´-말단 또는 5´-수산기를 갖는 단일 뉴클레오티드로 옮기는 것을 촉매합니다 |
5’(ssDNA, dsDNA, RNA) |
✘ 아니요 | ✘ 아니요 | ✘ 아니요 | ✘ 아니요 |
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